苯丙酮尿癥是單基因遺傳病,科學(xué)家將正?;駾導(dǎo)入該病患者的細胞,以治療該病。圖甲為A、B、C三種質(zhì)粒,圖乙為含有目的基因D的DNA片段,圖丙為重組載體的示意圖。Ap為氨芐青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因,LacZ基因編碼產(chǎn)生的酶可以分解物質(zhì)X-gal,從而使菌落顯現(xiàn)出藍色。若無該基因或該基因被破壞,則菌落呈白色。,EcoRI(0.6Kb)、PvuI(0.8Kb)為限制酶及其切割位點與復(fù)制原點之間的距離?;卮鹣铝袉栴}:
(1)基因工程操作的核心步驟是 基因表達載體的構(gòu)建基因表達載體的構(gòu)建。圖甲中三種質(zhì)粒適宜作為運載體的是質(zhì)粒 BB。
(2)獲取目的基因D時應(yīng)選擇乙圖中的 PvuⅠPvuⅠ對其所在的DNA進行切割。
(3)將目的基因D和甲圖中相應(yīng)質(zhì)粒連接后,得到圖丙中三種方式。為選出正向連接的重組質(zhì)粒,使用 EcoRⅠEcoRⅠ對質(zhì)粒完全酶切后,進行電泳分析。若是正向連接載體,電泳圖譜中出現(xiàn)長度為 1.21.2Kb和 5.55.5Kb兩條帶。
(4)利用自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞,要在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、已轉(zhuǎn)化的含空質(zhì)粒的受體細胞和未轉(zhuǎn)化成功的細胞中篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒的受體細胞的方法是在含有 氨芐青霉素氨芐青霉素和 X-galX-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng),形成 白色白色(填“藍色”或“白色”)菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】基因表達載體的構(gòu)建;B;PvuⅠ;EcoRⅠ;1.2;5.5;氨芐青霉素;X-gal;白色
【解答】
【點評】
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