基因工程在農(nóng)牧業(yè)、食品業(yè)和醫(yī)藥等方面展示出廣闊應(yīng)用前景
（1）構(gòu)建小鼠乳腺生物反應(yīng)器批量生產(chǎn)人胰島素，通過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

獲得cDNA，再PCR后獲得人胰島素基因。在PCR過程中溫度先上升到90℃以上，后降低到50℃其目的分別是

高溫使模板雙鏈DNA解旋為單鏈

高溫使模板雙鏈DNA解旋為單鏈

、

促進(jìn)引物與單鏈DNA相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合

促進(jìn)引物與單鏈DNA相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合

。一條單鏈cDNA在PCR儀中進(jìn)行n次循環(huán)，需要消耗

2ⁿ-1

2ⁿ-1

個引物。構(gòu)建的表達(dá)載體導(dǎo)入的受體細(xì)胞是

受精卵

受精卵

。
（2）若受體細(xì)胞是大腸桿菌，常用Ca²⁺處理大腸桿菌，使其處于感受態(tài)，有利于

吸收周圍環(huán)境中的DNA

吸收周圍環(huán)境中的DNA

。理論上用大腸桿菌作為“工程菌株”制備的胰島素缺乏生物活性，從細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能的角度分析，原因是

大腸桿菌是原核生物，沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，無法對蛋白質(zhì)加工分泌到細(xì)胞外

大腸桿菌是原核生物，沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，無法對蛋白質(zhì)加工分泌到細(xì)胞外

。
（3）人肺特異性x蛋白（LUNX）基因是某種肺癌診斷的標(biāo)志物。為研究LUNX基因的增強(qiáng)子是否具有增強(qiáng)基因表達(dá)的功能，及其發(fā)揮作用的位置是位于啟動子的上游還是下游?？蒲腥藛T利用PCR技術(shù)擴(kuò)增了3種LUNX基因增強(qiáng)子片段（用E1～E3表示）分別定向連接到pGL3載體中熒光素酶報(bào)告基因（luc⁺）、SV40啟動子的上游和下游，如圖1和圖2所示。通過相關(guān)技術(shù)檢測熒光素酶的活性，從而對增強(qiáng)子的功能進(jìn)行判斷，luc⁺的表達(dá)強(qiáng)度越強(qiáng)，熒光素酶的活性越高。

①以上LUNX基因增強(qiáng)子片段經(jīng)回收純化測序正確后，將雙酶切后的PCR產(chǎn)物分別定向連接到用

KpnI和XhoI

KpnI和XhoI

雙酶切和

BamHI和SalI

BamHI和SalI

雙酶切的pGL3載體中，構(gòu)建LUNX基因增強(qiáng)子分別位于報(bào)告基因上游和下游的載體。
②利用相關(guān)技術(shù)對熒光素酶的活性進(jìn)行檢測，結(jié)果如圖3，能得出結(jié)論

增強(qiáng)子E1、E2、E3在下游都能增強(qiáng)表達(dá)，其中E1效果最為顯著。E3在啟動子的上游下游都能增強(qiáng)表達(dá)

增強(qiáng)子E1、E2、E3在下游都能增強(qiáng)表達(dá)，其中E1效果最為顯著。E3在啟動子的上游下游都能增強(qiáng)表達(dá)

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