科學(xué)家將CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)導(dǎo)入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒并進(jìn)行改造，通過同源重組實(shí)現(xiàn)目的基因的精確插入，利用該方法已培育出了耐寒的玉米新品種（轉(zhuǎn)入CXE-20耐寒基因，其表達(dá)產(chǎn)物CXE-20蛋白是一種植物獲得耐寒性不可或缺的防冷凍蛋白）。圖1表示構(gòu)建轉(zhuǎn)基因耐寒玉米重組質(zhì)粒的過程，其中Cas9-gRNA是CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)基因，HRA是抗除草劑基因，HR1和HR2是同源重組序列，圖2表示重組質(zhì)粒與受體細(xì)胞核DNA重組的過程。請(qǐng)回答：
（1）限制酶BamHⅠ、SacⅠ、HindⅢ、EcoRⅠ的識(shí)別序列分別是G↓GATCC、GAGCT↓C、A↓AGCTT、G↓AATTC，過程①所用引物如下，則過程②使用的限制酶是 SacⅠ和 EcoRⅠSacⅠ和 EcoRⅠ。
5'-CGCGAGCTCATGAGAAAGGGCCCGTGG-3'
5'-CGGAATTCCTATCCCCAGAGAGGTAGCGA-3'
（2）如圖3表示Cas9-gRNA復(fù)合體切割DNA的示意圖，其靶序列是5'-CGAAAG……GTACGT-3'，根據(jù)圖中靶序列設(shè)計(jì)的gRNA中相應(yīng)序列是5'-ACGUAC……CUUUCGACGUAC……CUUUCG-3'，Cas9-gRNA復(fù)合體切割DNA的 磷酸二酯磷酸二酯鍵使其斷裂。
（3）用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化玉米幼胚后，在培養(yǎng)基中加入 除草劑除草劑篩選出導(dǎo)入目的基因幼胚。在轉(zhuǎn)化玉米的過程中，使用改造后的Ti質(zhì)粒的優(yōu)點(diǎn)是 能夠在特定位點(diǎn)插入（目的）基因片段能夠在特定位點(diǎn)插入（目的）基因片段。
（4）現(xiàn)對(duì)篩選出的10棵植株進(jìn)行DNA水平的檢測(cè)，基因長(zhǎng)度及電泳結(jié)果如圖4。請(qǐng)?zhí)顚懕砀?，完成?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：
| 組別 | 植株編號(hào)1-10 | 對(duì)照組1 | 對(duì)照組2 |
| 模板 | ① （提取的）1-10 號(hào)植株基因組 DNA （提取的）1-10 號(hào)植株基因組 DNA |
重組質(zhì)粒 | ② 非轉(zhuǎn)基因植株基因組 DNA 非轉(zhuǎn)基因植株基因組 DNA |
| PCR體系中其他物質(zhì) | 擴(kuò)增緩沖液、水、依據(jù)③ HR1 和 HR2 兩端的部分堿基序列 HR1 和 HR2 兩端的部分堿基序列 設(shè)計(jì)的引物、TaqDNA聚合酶、④4 種脫氧核苷酸/dNTP（Mg2+） 4 種脫氧核苷酸/dNTP（Mg2+） 等 |
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| 電泳結(jié)果 | ⑤ 4、7、8、9 4、7、8、9 號(hào)玉米中成功插入了外源基因，這些植株自交后會(huì)發(fā)生性狀分離，其判斷依據(jù)是⑥出現(xiàn) 1kb 左右的 DNA 片段，說明其是雜合子 出現(xiàn) 1kb 左右的 DNA 片段，說明其是雜合子 。 |
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（抗）CXE-20 蛋白抗體
（抗）CXE-20 蛋白抗體
（物質(zhì)）檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米細(xì)胞中目的基因是否表達(dá)。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】SacⅠ和 EcoRⅠ；ACGUAC……CUUUCG；磷酸二酯；除草劑；能夠在特定位點(diǎn)插入（目的）基因片段；（提取的）1-10 號(hào)植株基因組 DNA；非轉(zhuǎn)基因植株基因組 DNA；HR1 和 HR2 兩端的部分堿基序列；4 種脫氧核苷酸/dNTP（Mg2+）；4、7、8、9；出現(xiàn) 1kb 左右的 DNA 片段，說明其是雜合子；（抗）CXE-20 蛋白抗體
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/5/4 8:0:8組卷：19引用：3難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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