基因工程自20世紀70年代興起后，在短短的30年間，得到了飛速的發(fā)展，目前已成為生物科學的核心技術。基因工程的基本操作程序主要包括四個步驟：
（1）目的基因的獲?。?br />①如果目的基因的核苷酸序列是已知的，可用化學合成法化學合成法合成目的基因，或者用PCR技術擴增目的基因；
②如果目的基因的核苷酸序列是未知的，可以建立一個包括該種生物所有基因的基因組文庫，或者通過逆轉錄逆轉錄方法建立cDNA文庫。
（2）基因表達載體的構建：
①對于遺傳背景未知的生物，可提取該生物的基因組DNA，用多種限制限制酶切割成各種不同DNA片段，分別導入大腸桿菌（如圖所示）。由于切割后的基因片段大小不一，有的片段可能含有多個基因，不宜直接導入表達載體，所以可以先將它們分別與克隆質粒（如PBR322）連接構建重組載體，利用加入氨芐青霉素氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選得到多個大腸桿菌菌落，不同的菌落中含有相同或不同相同或不同（“相同”、“不同”、“相同或不同”）的基因。將轉移到纖維素膜上的細菌裂解，釋放出DNA，利用分子雜交技術檢測目的基因，依據圖示雜交帶，可進一步選取bb菌落（填寫圖中字母）繼續(xù)培養(yǎng)，從而獲得含有目的基因的受體菌。再將獲得的目的基因與相應的質粒（如pET）連接構建表達載體，pET質粒含有卡那霉素抗性基因、復制原點外，還必須有啟動子和終止子啟動子和終止子，以利于DNA片段在受體細胞中進行表達。
②與上述方法相比，通過cDNA文庫獲取的目的基因，可直接與pET質粒連接構建表達載體，理由是cDNA片段較小cDNA片段較小。
（3）將目的基因導入受體細胞：
如果目的基因來自真核細胞的基因組DNA序列，轉化的受體細胞一般不能為大腸桿菌，若目的基因來自cDNA文庫，則受體細胞可不受限制，原因是cDNA序列無內含子，真核細胞基因序列中含有內含子，大腸桿菌等原核細胞無法對內含子轉錄片段進行剪切修飾cDNA序列無內含子，真核細胞基因序列中含有內含子，大腸桿菌等原核細胞無法對內含子轉錄片段進行剪切修飾。
（4）目的基因的檢測與鑒定：
導入受體細胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達其遺傳特性，需要通過分子水平檢測和個體生物學水平鑒定。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】化學合成法；逆轉錄；限制；氨芐青霉素；相同或不同；b；啟動子和終止子；cDNA片段較??；cDNA序列無內含子，真核細胞基因序列中含有內含子，大腸桿菌等原核細胞無法對內含子轉錄片段進行剪切修飾
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：13引用：2難度：0.7
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（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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