四環(huán)素是放線菌產(chǎn)生的一種廣譜抗生素，既可以用來進(jìn)行動(dòng)物疾病的治療，還可以作為飼料的添加劑促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。然而，四環(huán)素的化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在動(dòng)物體內(nèi)并不能被完全吸收轉(zhuǎn)化，大部分以原尿形式排出體外，易在環(huán)境中積累，造成污染。研究人員從養(yǎng)雞場(chǎng)糞便堆肥中篩選獲得兩株對(duì)四環(huán)素具有一定降解能力的菌株，并探究其對(duì)四環(huán)素降解的最佳條件，為修復(fù)及治理被四環(huán)素污染的環(huán)境提供菌種資源和理論依據(jù)?；卮鹣铝袉栴}：
（1）為篩選出四環(huán)素降解菌，從飼料中添加

四環(huán)素

四環(huán)素

的養(yǎng)雞場(chǎng)糞便中取5g樣品，加入

無菌水

無菌水

制成懸液接種至適宜的液體培養(yǎng)基中，置于30℃、160t/min搖床恒溫振蕩培養(yǎng)，此操作的目的是

增加四環(huán)素降解菌的濃度

增加四環(huán)素降解菌的濃度

。
（2）培養(yǎng)結(jié)束后對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋，從不同稀釋倍數(shù)的稀釋液中各吸取100μL稀釋液，涂布于含有一定濃度四環(huán)素的選擇培養(yǎng)基上。待長(zhǎng)出單菌落，依據(jù)

菌落的形狀，大小等特征

菌落的形狀，大小等特征

對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定，挑選單菌落直接用

平板劃線

平板劃線

法進(jìn)一步分離純化。若要臨時(shí)保藏菌種，可將其接種到試管的

固體斜面培養(yǎng)基

固體斜面培養(yǎng)基

上，待長(zhǎng)成菌落后再置于4℃冰箱中保藏，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
（3）分離得到兩種對(duì)四環(huán)素具有降解能力的菌種A和B。為研究不同碳源和氮源時(shí)，兩種菌對(duì)四環(huán)素降解能力的影響，在含適宜濃度的四環(huán)素的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中分別加入1%不同碳源和氮源作為實(shí)驗(yàn)組，不加碳源或氮源的作為對(duì)照組，6d后測(cè)定四環(huán)素殘留量結(jié)果如圖所示：
①四環(huán)素可為能降解四環(huán)素的微生物提供碳源，碳源可為微生物的生長(zhǎng)提供

能量

能量

和

合成其他物質(zhì)的原料

合成其他物質(zhì)的原料

；分析可知，在碳源和氮源分別為

蔗糖

蔗糖

和

蛋白胨

蛋白胨

時(shí)，A菌降解四環(huán)素的能力最高；添加蔗糖對(duì)B菌降解四環(huán)素具有

促進(jìn)

促進(jìn)

作用。
②為保證實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性，本實(shí)驗(yàn)還需要再添加一組對(duì)照實(shí)驗(yàn)，該對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)置為

不添加碳源、氮源和四環(huán)素降解菌

不添加碳源、氮源和四環(huán)素降解菌

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