COR基因是植物的抗寒基因。CBF基因控制合成的轉(zhuǎn)錄因子,CBF能特異性結合COR基因啟動子區(qū),激活COR基因的表達。將不同植物中獲取的CBF基因和COR基因組合起來構建抗寒基因超量表達載體,轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)能提高植物的抗寒性?;卮鹣铝袉栴}:

(1)為擴增CBF基因,應選擇圖甲中的引物 Ⅰ和ⅣⅠ和Ⅳ,經(jīng)過四次循環(huán)形成的產(chǎn)物中同時含有所需引物的DNA占 7878。
(2)COR基因超量表達依賴于適宜的啟動子。啟動子有三種:各種器官中均起作用的啟動子、特定器官中起作用的啟動子、特定條件誘導的啟動子。多種類型啟動子可組合使用。從減少物質(zhì)和能量消耗的角度出發(fā),最好選擇 特定器官中起作用的和特定條件誘導特定器官中起作用的和特定條件誘導的啟動子,使馬鈴薯塊莖在寒冷刺激下才啟動COR基因的表達。轉(zhuǎn)錄因子CBF特異性識別下游靶基因啟動子區(qū)后,可能與 RNA聚合RNA聚合酶結合形成復合體從而激活COR基因的表達。
(3)當遇到平末端和黏性末端不能連接時,可利用限制酶Klenow酶特有的5′→3′DNA聚合酶活性,將黏性末端補平后再與平末端連接。根據(jù)圖乙分析,構建抗寒基因超量表達載體時,為實現(xiàn)經(jīng)XbaⅠ切割后的CBF基因與COR基因表達載體的連接,應選用的限制酶是 SamI、Klenow酶SamI、Klenow酶。
(4)已知A基因表達產(chǎn)物能參與核孔復合體的形成影響RNA運出核,在植物抗寒過程中發(fā)揮重要的作用??茖W家從抗寒轉(zhuǎn)基因植物中篩選到一個A基因突變的植株(a突變體)。研究發(fā)現(xiàn),a突變體中CBF基因的表達水平降低。由此推斷a突變體抗寒能力 減弱減弱(填“提高”或“減弱”),其機理是 a突變體中A基因表達產(chǎn)物減少,影響核孔復合體的形成,導致CBF基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA無法轉(zhuǎn)運出細胞核,轉(zhuǎn)錄因子CBF減少,使得COR基因的表達水平明顯降低,產(chǎn)生保護細胞免受凍害的親水性多肽減少,植物抗寒能力減弱a突變體中A基因表達產(chǎn)物減少,影響核孔復合體的形成,導致CBF基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA無法轉(zhuǎn)運出細胞核,轉(zhuǎn)錄因子CBF減少,使得COR基因的表達水平明顯降低,產(chǎn)生保護細胞免受凍害的親水性多肽減少,植物抗寒能力減弱。
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【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】Ⅰ和Ⅳ;;特定器官中起作用的和特定條件誘導;RNA聚合;SamI、Klenow酶;減弱;a突變體中A基因表達產(chǎn)物減少,影響核孔復合體的形成,導致CBF基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA無法轉(zhuǎn)運出細胞核,轉(zhuǎn)錄因子CBF減少,使得COR基因的表達水平明顯降低,產(chǎn)生保護細胞免受凍害的親水性多肽減少,植物抗寒能力減弱
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【解答】
【點評】
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