甜柿鮮果肉中含有可溶性糖、微量元素、維生素和β-胡蘿卜素等多種成分，營養(yǎng)價值高，深受消費者的喜愛。甜柿的自然脫澀與乙醛代謝關鍵酶基因（PDC）密切相關，推測澀味程度可能與PDC基因的表達情況有關。為篩選PDC基因的調控蛋白，科研人員進行了下列實驗?；卮鹣铝袉栴}。
（1）啟動子位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的位點，同時啟動子區(qū)域存在著許多調控蛋白的結合位點，RNA聚合酶和調控蛋白共同影響了基因的 轉錄轉錄水平。
（2）PDC基因的啟動子序列未知，為獲得大量該基因啟動子所在片段，可利用限制酶將基因組DNA進行酶切，然后在 DNA連接酶DNA連接酶的作用下將已知序列信息的接頭片段連接在PDC基因的上游，根據(jù)接頭片段和PDC基因編碼序列設計引物進行 PCRPCR擴增，在擴增過程中使用的酶稱為 Taq酶Taq酶，在該酶的作用下可以將4種脫氧核苷酸加到引物的一端。
（3）AD基因表達出的AD蛋白與啟動子足夠靠近時，能夠激活后續(xù)基因轉錄，據(jù)此可利用與AD蛋白形成的融合蛋白來篩選待測蛋白。利用質粒A構建含有PDC基因啟動子片段的重組質粒并導入代謝缺陷型酵母菌，用不含 尿嘧啶尿嘧啶的培養(yǎng)基可篩選出成功轉化的酵母菌Y1H；將從甜柿中提取的RNA逆轉錄形成的各種cDNA與質粒G連接后導入酵母菌，此時應選擇質粒G中的位點 22（填序號1～5）作為cDNA的插入位點，最終獲得攜帶不同cDNA片段的酵母菌群Y187。
（4）重組酵母Y1H與Y187能夠進行接合生殖，形成的接合子含有兩種酵母菌質粒上的所有基因。若接合子能在含有 金擔子素金擔子素的培養(yǎng)基中生存，則推測待測蛋白是PDC基因的調控蛋白。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】轉錄；DNA連接酶；PCR；Taq酶；尿嘧啶；2；金擔子素
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：2引用：1難度：0.7
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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