大豆凝集素（L）具有防御病害的功能，該蛋白存在于大豆種子的子葉中。研究人員嘗試?yán)玫鞍譒的特性構(gòu)建抗病毒馬鈴薯，進行了以下實驗。
（1）從大豆抗病品種中獲取L基因，通過PCR的方法在基因兩側(cè)引入限制酶酶切位點，根據(jù)圖1中T-DNA的結(jié)構(gòu)，引入適宜的酶切位點是

XbaⅠ和SmaⅠ

XbaⅠ和SmaⅠ

。通過

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

法將酶切、連接產(chǎn)物導(dǎo)入馬鈴薯細胞，獲得多株轉(zhuǎn)基因抗病馬鈴薯。

（2）為研究轉(zhuǎn)基因馬鈴薯抗病毒植株的分子機理，研究人員利用Taqman探針和反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)，對轉(zhuǎn)基因馬鈴薯多種防衛(wèi)反應(yīng)基因的表達進行檢測：
①提取抗病植株葉片細胞的

總mRNA

總mRNA

進行反轉(zhuǎn)錄，獲取cDNA．
②設(shè)計各種防衛(wèi)基因的引物，利用圖2所示的原理進行PCR。Taqman探針的結(jié)構(gòu)如圖所示，由于

探針有可以堿基互補配對的片段

探針有可以堿基互補配對的片段

，游離探針上的熒光素會與淬滅劑結(jié)合無法發(fā)出熒光。在PCR過程中，Taq酶體現(xiàn)出

5'→3'聚合酶與5'→3'外切酶

5'→3'聚合酶與5'→3'外切酶

兩種酶活性，在相同擴增時間中，總熒光值與

待測基因的mRNA（轉(zhuǎn)錄）量

待測基因的mRNA（轉(zhuǎn)錄）量

成正比。
③經(jīng)檢測，轉(zhuǎn)基因馬鈴薯水楊酸（SA）信號通路相關(guān)蛋白基因表達量顯著上升，SA是一種植物抗病有關(guān)的調(diào)節(jié)物質(zhì)。研究人員推測L儀器檢測通過激活SA途徑提升抗病能力，欲驗證這一假設(shè)，需要進行的實驗是

敲除SA受體基因或抑制SA信號途徑，檢測轉(zhuǎn)基因馬鈴薯的抗病情況

敲除SA受體基因或抑制SA信號途徑，檢測轉(zhuǎn)基因馬鈴薯的抗病情況

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