P24是HIV病毒顆粒的主要結(jié)構(gòu)蛋白（大小約為26KD），是P24基因的表達(dá)產(chǎn)物。P24單克隆抗體在HIV感染的診斷、治療等方面有重要意義，P24單克隆抗體的制備主要包括三個(gè)階段：利用基因工程生產(chǎn)P24蛋白；利用細(xì)胞融合技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體；單克隆抗體活性的鑒定。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）提取HIV的總RNA，經(jīng) 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程獲得總cDNA。通過(guò)PCR技術(shù)可在總cDNA中專(zhuān)一性的擴(kuò)增出P24基因的cDNA，原因是 引物是根據(jù)P24基因?qū)?yīng)的cDNA的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的（含有/加入了能與之特異性結(jié)合的引物）引物是根據(jù)P24基因?qū)?yīng)的cDNA的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的（含有/加入了能與之特異性結(jié)合的引物）。
（2）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，需對(duì)質(zhì)粒和P24基因的cDNA用BamHI和XhoI進(jìn)行雙酶切，雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是 防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及質(zhì)粒和目的基因的反向連接防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及質(zhì)粒和目的基因的反向連接研究發(fā)現(xiàn)，P24基因的cDNA缺乏這兩種限制酶的識(shí)別序列。為此，在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)，需要 在引物中加入限制酶BamHI和XhoI的識(shí)別序列在引物中加入限制酶BamHI和XhoI的識(shí)別序列。
（3）將重組質(zhì)粒（含卡那霉素抗性基因）導(dǎo)入宿主菌體細(xì)胞后，進(jìn)行的部分操作及結(jié)果如圖所示。圖中①②兩處的接種方法 不同不同（填“相同”或“不同”），在固體平板培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)的菌落不一定能合成P24，其原因是 重組質(zhì)粒表達(dá)了卡那霉素抗性基因，但不一定表達(dá)了P24基因重組質(zhì)粒表達(dá)了卡那霉素抗性基因，但不一定表達(dá)了P24基因。蛋白凝膠分析結(jié)果圖中，1為蛋白Marker,2為不含物質(zhì)A的菌液，3為含物質(zhì)A的菌液，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明P24較高的是 33（填“2”或“3”），據(jù)此推測(cè)物質(zhì)A的作用是 物質(zhì)A能誘導(dǎo)P24基因的表達(dá)物質(zhì)A能誘導(dǎo)P24基因的表達(dá)。
（4）用P24蛋白對(duì)小鼠以靜脈注射的方式進(jìn)行加強(qiáng)免疫3次，其目的是 促使小鼠產(chǎn)生更多的（能分泌抗P24抗體的）B細(xì)胞促使小鼠產(chǎn)生更多的（能分泌抗P24抗體的）B細(xì)胞。取免疫后小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞，用 仙臺(tái)病毒或聚乙二醇或電刺激法仙臺(tái)病毒或聚乙二醇或電刺激法促融，并經(jīng)HAT培養(yǎng)基篩選獲得雜交瘤細(xì)胞。進(jìn)一步篩選時(shí)，需先對(duì)含雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋?zhuān)缓笥每乖贵w雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，篩選出具有 能產(chǎn)生P24抗體（又能無(wú)限增殖）能產(chǎn)生P24抗體（又能無(wú)限增殖）特性的細(xì)胞。再將所得細(xì)胞進(jìn)行克隆培養(yǎng)，進(jìn)而獲得P24單克隆抗體。克隆培養(yǎng)的關(guān)鍵是 保證分離出來(lái)的細(xì)胞是一個(gè)而不是多個(gè)保證分離出來(lái)的細(xì)胞是一個(gè)而不是多個(gè)。
（5）T細(xì)胞被HIV感染后，會(huì)與未被感染的T細(xì)胞發(fā)生融合，從而形成多核巨細(xì)胞，多核巨細(xì)胞不久死亡又釋放出大量新病毒。多核巨細(xì)胞的數(shù)量可作為P24單克隆抗體活性鑒定的指標(biāo)。請(qǐng)完善以下鑒定P24單克隆抗體活性的實(shí)驗(yàn)思路：
①將未被感染的T細(xì)胞等分為三組，處理如下：
A組：HIV感染的T細(xì)胞+未被感染的T細(xì)胞+細(xì)胞培養(yǎng)液；
B組：HIV感染的T細(xì)胞+未被感染的T細(xì)胞+P24單克隆抗體P24單克隆抗體；
C組：未被感染的T細(xì)胞+細(xì)胞培養(yǎng)液；
②48小時(shí)內(nèi)每隔8小時(shí)測(cè)定三組的多核巨細(xì)胞的數(shù)量，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。若P24單克隆抗體能有效抑制多核巨細(xì)胞的形成，請(qǐng)預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 
（以坐標(biāo)曲線圖的形式畫(huà)出）。
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；引物是根據(jù)P24基因?qū)?yīng)的cDNA的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的（含有/加入了能與之特異性結(jié)合的引物）；防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及質(zhì)粒和目的基因的反向連接；在引物中加入限制酶BamHI和XhoI的識(shí)別序列；不同；重組質(zhì)粒表達(dá)了卡那霉素抗性基因，但不一定表達(dá)了P24基因；3；物質(zhì)A能誘導(dǎo)P24基因的表達(dá)；促使小鼠產(chǎn)生更多的（能分泌抗P24抗體的）B細(xì)胞；仙臺(tái)病毒或聚乙二醇或電刺激法；能產(chǎn)生P24抗體（又能無(wú)限增殖）；保證分離出來(lái)的細(xì)胞是一個(gè)而不是多個(gè)；P24單克隆抗體；
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：32引用：2難度：0.6
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1．CD47是一種跨膜糖蛋白，它可與巨噬細(xì)胞表面的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，從而抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表面的CD47含量比正常細(xì)胞高1.6～5倍，導(dǎo)致吞噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的清除效果減弱?？茖W(xué)家推測(cè)，抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對(duì)巨噬細(xì)胞的抑制作用，為此他們按照如圖流程進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：7引用：3難度：0.6 -
2．雙特異性抗體是指一個(gè)抗體分子可以與兩個(gè)不同抗原或同一抗原的兩個(gè)不同抗原表位相結(jié)合，目前最常利用雜交瘤雜交法來(lái)制備。長(zhǎng)春花是原產(chǎn)于非洲東海岸的野生花卉，其所含的長(zhǎng)春堿具有良好的抗腫瘤作用。圖1是某雙特異性抗體作用圖。圖2是科研人員通過(guò)雜交—雜交瘤細(xì)胞技術(shù)（免疫的B淋巴細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞雜交技術(shù)）生產(chǎn)能同時(shí)識(shí)別癌胚抗原和長(zhǎng)春堿的雙特異性單克隆抗體的部分過(guò)程。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：
（1）與植物體細(xì)胞雜交相比，圖2中過(guò)程②特有的誘導(dǎo)融合的方法是，過(guò)程②選用的骨髓瘤細(xì)胞（選填“能”或“不能”）在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。
（2）對(duì)③篩選出的雜交瘤細(xì)胞，還需進(jìn)行和，才能篩選出足夠量的既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。與傳統(tǒng)血清抗體相比，單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)是（答出一點(diǎn)）。
（3）圖2中①步驟注射癌胚抗原的目的是。圖2方框內(nèi)需要經(jīng)過(guò)次篩選，才能獲取單克隆雜交—雜交瘤細(xì)胞。體外培養(yǎng)到一定時(shí)期的單克隆雜交—雜交瘤細(xì)胞會(huì)因?yàn)?、有害代謝物的積累和培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻，需進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
（4）與直接使用長(zhǎng)春堿相比，將長(zhǎng)春堿與雙特異性單克隆抗體結(jié)合后給藥，對(duì)人體的副作用更小，原因是。發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：21引用：4難度：0.5 -
3．使用高效的細(xì)胞毒素藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞但細(xì)胞毒素沒(méi)有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害。這限制了它在臨床上的應(yīng)用?？贵w一藥物偶聯(lián)物（ADC）通過(guò)將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細(xì)胞毒素）三部分組成，它的作用機(jī)制如圖所示。下列敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 3:30:1組卷：18引用：2難度：0.7
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