熒光蛋白（GFP）在紫外光下會發(fā)出綠色熒光，某科研團(tuán)隊將GFP基因插入質(zhì)粒P中構(gòu)建了重組質(zhì)粒載體P0，用于基因工程中基因表達(dá)載體（P1）的篩選和鑒定。部分過程如圖所示，如表為部分限制酶的識別序列及切割位點?；卮饐栴}：
| 限制酶 | EcoRⅤ | Sau3AⅠ | BamHⅠ |
| 識別序列及切割位點 | CTA↓TAG GTA↑TAG |
↓GATC CATG↑ |
G↓GATCC CCTAG↑G |
平
平
末端，過程②表示利用PCR技術(shù)擴增目的基因，前提是要根據(jù) 一段已知目的基因的核苷酸序列
一段已知目的基因的核苷酸序列
設(shè)計出引物，此外還需在引物的一端加上 GATC
GATC
序列，以便于P1的構(gòu)建和篩選。（2）過程③中，質(zhì)粒P0需用限制酶
BamHⅠ
BamHⅠ
切割，才能與擴增出的目的基因在 DNA連接
DNA連接
酶作用下形成P1。（3）為了篩選出含有質(zhì)粒P1的菌落，需采用添加
四環(huán)素
四環(huán)素
的培養(yǎng)基平板進(jìn)行培養(yǎng)，在紫外光激發(fā)下 不發(fā)出綠色熒光
不發(fā)出綠色熒光
的菌落，即為含有P1的菌落。（4）提取經(jīng)上述篩選所得菌落的RNA，通過
逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄）
逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄）
獲得DNA，再進(jìn)行PCR擴增，若最終未能檢測出目的基因，可能的原因是 目的基因未能在受體菌中轉(zhuǎn)錄
目的基因未能在受體菌中轉(zhuǎn)錄
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】平；一段已知目的基因的核苷酸序列；GATC；BamHⅠ；DNA連接；四環(huán)素；不發(fā)出綠色熒光；逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄）；目的基因未能在受體菌中轉(zhuǎn)錄
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：18引用：2難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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