通常真核細(xì)胞翻譯的起始必須依賴于mRNA的5′端帽子結(jié)構(gòu)，而內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)（IRES）則是位于mRNA內(nèi)部的核糖體識別、結(jié)合序列，IRES使翻譯可以從mRNA內(nèi)部開始。人溶菌酶和人乳鐵蛋白是人乳中重要的抗菌蛋白，科研人員構(gòu)建人溶菌酶基因（hLYZ）和人乳鐵蛋白基因（hLTF）雙基因表達(dá)載體，并獲得轉(zhuǎn)基因牛胚胎。如圖表示雙基因表達(dá)載體的主要構(gòu)建過程，請回答下列問題。

（1）IRES的基本單位是

核糖核苷酸

核糖核苷酸

，翻譯時核糖體在mRNA移動方向是

5'→3'

5'→3'

（5′→3′或3′→5′）。與兩個基因直接連接形成融合基因相比，兩個基因之間插入IRES序列的意義是

便于得到兩種具有一定功能的蛋白質(zhì)

便于得到兩種具有一定功能的蛋白質(zhì)

。
（2）為實現(xiàn)hLTF與IRES序列的連接，在PCR擴(kuò)增基因片段時通常在引物的5′端添加特定的限制酶識別序列，而不在3′端添加的原因是

使引物的3'端與模板鏈嚴(yán)格互補(bǔ)配對，保證子鏈的延伸

使引物的3'端與模板鏈嚴(yán)格互補(bǔ)配對，保證子鏈的延伸

。
（3）過程①中，用

XbaⅠ和NheⅠ

XbaⅠ和NheⅠ

切割質(zhì)粒a、b后，再用

電泳法

電泳法

（方法）分離，收集質(zhì)粒a的hLTF片段，與質(zhì)粒b的大片段連接，獲得重組質(zhì)粒1。
（4）過程②中，用BamHⅠ分別處理重組質(zhì)粒1和質(zhì)粒c,再連接形成的重組質(zhì)粒不止一種，這是因為

目的基因與質(zhì)粒c存在正反連接、目的基因多拷貝與質(zhì)粒c連接等

目的基因與質(zhì)粒c存在正反連接、目的基因多拷貝與質(zhì)粒c連接等

。用BamHⅠ對重組質(zhì)粒2進(jìn)行酶切，獲得的DNA片段大小為

3.2kb和8.2kb

3.2kb和8.2kb

。
（5）科研人員以包含重組質(zhì)粒2的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染乳腺上皮細(xì)胞時，在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入一定濃度的新霉素的主要目的是

便于篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒2的牛乳腺上皮細(xì)胞

便于篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒2的牛乳腺上皮細(xì)胞

。選擇乳腺上皮細(xì)胞作為受體細(xì)胞便于檢測

hLYZ和hLTF能否表達(dá)

hLYZ和hLTF能否表達(dá)

。
（6）研究人員試圖以轉(zhuǎn)hLYZ與hLTF的奶牛乳腺上皮細(xì)胞作為供體細(xì)胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因克隆胚胎，在此過程中主要涉及的現(xiàn)代生物技術(shù)有

體細(xì)胞核移植技術(shù)、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)

體細(xì)胞核移植技術(shù)、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)

。