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酯酶結(jié)合熒光分析法可對有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥進行檢測,某研究院利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得一種催化效率高、農(nóng)藥敏感性強的微生物酯酶。
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(1)人工合成酯酶基因后通過PCR技術(shù)可實現(xiàn)擴增,需要設(shè)計兩種引物,設(shè)計引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的
3’端
3’端
開始連接脫氧核苷酸。為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒,需要在引物的
5’
5’
端設(shè)計
限制性內(nèi)切核酸
限制性內(nèi)切核酸
酶的識別序列。某質(zhì)粒圖譜和目的基因的序列如上圖所示,應(yīng)選擇引物
①③
①③
(填數(shù)字)。(①-④中加粗表示識別序列前的保護堿基,增強上述酶與目的基因的結(jié)合)
①5’-CCGGAATTCATGCTTGATATGCCAATC-3’
②5’-CCCAAGCTTATGCTTGATATGCCAATC-3’
③5’-CCCAAGCTTCTAGTCGAACACAAGAAG-3’
④5’-CCGGAATTCCTAGTCGAACACAAGAAG-3’
(2)若提取高產(chǎn)酯酶野生菌的基因組DNA,用設(shè)計的引物和合適的條件進行PCR,其產(chǎn)物可用
(瓊脂糖凝膠)電泳
(瓊脂糖凝膠)電泳
鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)有目的基因以外的雜交帶存在,分析可能原因是:
在基因組DNA中有其他引物結(jié)合的位點/引物特異性不強/引物過短
在基因組DNA中有其他引物結(jié)合的位點/引物特異性不強/引物過短
。解決措施:在目的基因的
上、下游
上、下游
(填“內(nèi)部”或“上、下游”)重新設(shè)計引物進行PCR。
限制酶 識別序列與切割位點 限制酶 識別序列與切割位點
PstⅠ 5’-CTGCA↓G-3’ NdeⅡ 5’-↓GATC-3’
HindⅢ 5’-A↓AGCTT-3’ EcoRⅠ 5’-G↓AATTC-3’
DpnⅡ 5’-↓GATC-3’ AluⅠ 5’-AG↓CT-3’
(3)將PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒用限制酶酶切,酶切產(chǎn)物純化后,用
DNA連接酶
DNA連接酶
連接,連接產(chǎn)物導(dǎo)入大腸桿菌前需用
Ca2+(氯化鈣溶液)
Ca2+(氯化鈣溶液)
處理大腸桿菌,使其處于感受態(tài)。

【答案】3’端;5’;限制性內(nèi)切核酸;①③;(瓊脂糖凝膠)電泳;在基因組DNA中有其他引物結(jié)合的位點/引物特異性不強/引物過短;上、下游;DNA連接酶;Ca2+(氯化鈣溶液)
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:9引用:2難度:0.4
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    發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6
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    (1)獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有
     
    (答出2項)等。
    (2)為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒,應(yīng)該選擇
     
    (填酶)切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入
     
    (填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”)對目的基因進行篩選。
    (3)培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程
     
    (填序號)。過程②③采用的方法是
     
    。
    (4)⑤過程需要用到
     
    等植物激素,在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中,這兩種植物激素的比例會發(fā)生變化,原因是
     
    。

    發(fā)布:2024/12/20 2:30:1組卷:16引用:5難度:0.5
  • 3.如表為5種限制酶的識別序列及切割位點,如圖為某種質(zhì)粒和目的基因,箭頭所指為限制酶酶切位點。現(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中,以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說法正確的是( ?。?
    限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ
    識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG
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    發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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