在一定劑量范圍內(nèi)苜蓿中的黃酮對動物乳腺上皮細胞增殖具有一定促進作用。為研究不同濃度苜蓿黃酮對乳腺上皮細胞的增殖及其對乳酸脫氫酶（LDH）活性的影響，科研人員用MTT法以細胞懸液OD值為觀測指標測定細胞增殖能力，進行了相關(guān)實驗研究。請完善實驗思路，并根據(jù)實驗結(jié)果進行分析。
實驗材料與儀器：
用二甲基亞砜（DMSO）配制的濃度為25、50、75和100μ/mL苜蓿黃酮溶液、用動物細胞培養(yǎng)液配制的一定密度的動物乳腺上皮細胞懸液、光電比色計、MTT法細胞增殖測定儀器等
（要求與說明：MTT法測定細胞增殖具體操作不作要求；乳酸脫氫酶（LDH）活性檢測不作要求；在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，OD值與細胞數(shù)成正比；培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液變化忽略不計；實驗條件適宜）
（1）完善實驗思路
①取若干培養(yǎng)瓶，各加入998mL的細胞懸液，分為5組，編號甲～戊，每組5個重復。
②甲組：加入2mL二甲基亞礬；

實驗組乙～戊：分別加入等量的用二甲基亞砜配制的濃度為25、50、75和100μg/mL的苜蓿黃酮

實驗組乙～戊：分別加入等量的用二甲基亞砜配制的濃度為25、50、75和100μg/mL的苜蓿黃酮

。
③

細胞培養(yǎng)到第3天和第5天時，分別用MTT法測各組細胞懸液OD值，取平均值并記錄

細胞培養(yǎng)到第3天和第5天時，分別用MTT法測各組細胞懸液OD值，取平均值并記錄

。
④實驗第5天，

測各組乳酸脫氫酶（LDH）的活性，取平均值并記錄

測各組乳酸脫氫酶（LDH）的活性，取平均值并記錄

。
⑤

統(tǒng)計、比較、分析實驗結(jié)果

統(tǒng)計、比較、分析實驗結(jié)果

。
（2）結(jié)果分析與結(jié)論
苜蓿黃酮對某動物乳腺上皮細胞增殖及其乳酸脫氫酶（LDH）活性的影響

項目	時間/d	甲組	乙組 25μg/mL	丙組 50μg/mL	丁組 75μg/mL	戊組 100μg/mL
細胞增殖	3	0.37	0.38	0.38．	0.37	0.37
細胞增殖	5	0.39	0.39	0.41*	0.46*	0.40*
乳酸脫氫酶活性	5	1078.80	675.60*	573.21*	1138.04	796.89*

注：表中*表示與對照組機比有統(tǒng)計學上的顯著差異，不帶*數(shù)據(jù)表示與對照組無顯著差異；（單位：略）
根據(jù)如表可得實驗結(jié)論：
結(jié)論一：作用時間較短時（3天），苜蓿黃酮對細胞增殖無明顯作用；
結(jié)論二：

隨著培養(yǎng)時間加長（5天），較高濃度的苜蓿黃酮對細胞增殖有明顯促進作用

隨著培養(yǎng)時間加長（5天），較高濃度的苜蓿黃酮對細胞增殖有明顯促進作用

；
結(jié)論三：

在較低濃度或較高濃下，苜蓿黃酮顯著提高乳腺上皮細胞中的乳酸脫氫酶的活性

在較低濃度或較高濃下，苜蓿黃酮顯著提高乳腺上皮細胞中的乳酸脫氫酶的活性

。
（3）實驗分析
細胞呼吸中，乳酸脫氫酶（LDH）催化的反應(yīng)

不產(chǎn)生

不產(chǎn)生

（填“產(chǎn)生”或“不產(chǎn)生”）ATP，這一催化反應(yīng)發(fā)生在

厭氧

厭氧

（填“需氧”或“厭氧”）呼吸中。本實驗中還可用細胞培養(yǎng)上清液中LDH的濃度代表細胞的受損程度的原因是

正常情況下LDH分布在細胞內(nèi)，只有當細胞受損時乳酸脫氫酶（LDH）才能釋放出來，且受損越嚴重，釋放出來的LDH越多

正常情況下LDH分布在細胞內(nèi)，只有當細胞受損時乳酸脫氫酶（LDH）才能釋放出來，且受損越嚴重，釋放出來的LDH越多

。為減少微生物對實驗結(jié)果帶來的干擾，實驗中的動物細胞培養(yǎng)基中添加的胎牛血清可采用

過濾（或增加抗生素）

過濾（或增加抗生素）

（方法）去除雜菌。