人和大鼠的抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)蛋白是血漿中的一種重要抗凝血因子,主要由肝臟合成。臨床上,人的ATⅢ有預(yù)防和治療急慢性血栓形成的作用。目前,ATⅢ有3種來(lái)源,從血漿中純化、用基因工程細(xì)胞生產(chǎn)和用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)。
(1)在構(gòu)建ATⅢ基因工程細(xì)胞時(shí),可先從肝臟細(xì)胞中分離mRNA,通過(guò)反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄獲得目的基因cDNA;然后用DNA連接DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體構(gòu)建成基因表達(dá)載體;常用胎兒成纖維細(xì)胞作為ATⅢ基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞,原因是該細(xì)胞的全能性較高該細(xì)胞的全能性較高。
(2)大規(guī)模培養(yǎng)ATⅢ基因工程細(xì)胞時(shí),由于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象,常在培養(yǎng)容器中加入中空玻璃管,以擴(kuò)大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積。
(3)還可將ATⅢ基因工程細(xì)胞作為供體細(xì)胞,采用核移植核移植技術(shù)獲得克隆動(dòng)物,為保證ATⅢ基因在乳腺細(xì)胞中表達(dá),需將目的基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】反轉(zhuǎn)錄;DNA連接;該細(xì)胞的全能性較高;貼壁生長(zhǎng);核移植;啟動(dòng)子
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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