研究人員利用魚類腸道菌株MA35提取纖維素酶,按照“纖維素酶制備→纖維素酶純化和鑒定→纖維素酶活力檢測→纖維素酶酶學(xué)性質(zhì)研究”的思路開展研究?;卮鹣铝袉栴}:
(1)從魚類腸道中提取菌體后接種到 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),發(fā)酵完畢后將菌體與發(fā)酵液分離,菌體再加入緩沖液重新懸浮,利用超聲波破碎細(xì)胞。制備纖維素粗酶液的思路是 將發(fā)酵液和細(xì)菌破碎液進(jìn)行離心分離將發(fā)酵液和細(xì)菌破碎液進(jìn)行離心分離。
(2)對獲得的纖維素粗酶液用凝膠色譜柱進(jìn)行洗脫,該方法純化纖維素酶的原理是 不同質(zhì)量的蛋白質(zhì)在凝膠中的移動(dòng)路線長短和移動(dòng)的速度不同不同質(zhì)量的蛋白質(zhì)在凝膠中的移動(dòng)路線長短和移動(dòng)的速度不同。純化后的纖維素酶使用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法進(jìn)行純度鑒定。
(3)測定酶活力時(shí),需要以 煮沸滅菌煮沸滅菌的酶液作為對照組。實(shí)驗(yàn)組酶液加入羧甲基纖維素鈉溶液,反應(yīng)30 min后終止反應(yīng),以每分鐘釋放1 mmol 葡萄糖葡萄糖所需要的酶量作為1個(gè)酶活力單位。設(shè)置30~80℃,pH為3.0~10.0的條件進(jìn)行纖維素酶酶學(xué)性質(zhì)研究,主要目的是 探究纖維素酶的最適溫度和最適pH探究纖維素酶的最適溫度和最適pH。
【考點(diǎn)】發(fā)酵工程在食品、醫(yī)藥、農(nóng)牧業(yè)等工業(yè)上的應(yīng)用;蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的綜合;酶的特性及應(yīng)用.
【答案】液體培養(yǎng)基;將發(fā)酵液和細(xì)菌破碎液進(jìn)行離心分離;不同質(zhì)量的蛋白質(zhì)在凝膠中的移動(dòng)路線長短和移動(dòng)的速度不同;SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳;煮沸滅菌;葡萄糖;探究纖維素酶的最適溫度和最適pH
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:29引用:4難度:0.7
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