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遺傳毒性物質常存在于被化學物質污染的水體,可損傷生物的DNA,嚴重威脅人類健康。研究人員通過基因工程改造大腸桿菌,以期篩選對遺傳毒性物質反應靈敏的工程菌株,用于水質檢測。
(1)大腸桿菌DNA中存在可被遺傳毒性物質激活的毒性響應啟動子序列。將毒性響應啟動子插入圖1所示表達載體的P區(qū),獲得基因工程改造的大腸桿菌。當改造后的大腸桿菌遇到遺傳毒性物質時,
RNA聚合酶
RNA聚合酶
識別并與啟動子結合,驅動噬菌體裂解基因(SRR)
轉錄
轉錄
,表達產(chǎn)物可使大腸桿菌裂解。
(2)研究人員選取啟動子sul準備與圖1表達載體連接。圖2顯示了啟動子sul內(nèi)部存在的酶切位點,箭頭表示轉錄方向。
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①據(jù)圖1、2信息,克隆啟動子sul時,在其A端和B端應分別添加限制性內(nèi)切酶
XhoⅠ和SapⅠ
XhoⅠ和SapⅠ
的酶切位點,從而確保啟動子sul可與已被酶切的表達載體正確連接。
②將重組表達載體導入大腸桿菌,置于含有
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的選擇培養(yǎng)基中進行篩選、鑒定及擴大培養(yǎng),獲得工程菌sul。
(3)研究人員陸續(xù)克隆了其他4種啟動子(rec、imu、qnr、cda),分別連入表達載體,用同樣的方法獲得導入重組載體的工程菌,以篩選最靈敏的檢測菌株。
①將5種工程菌和對照菌在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后,檢測菌體密度,結果如圖3。圖中結果顯示
5種工程菌菌體數(shù)量增長趨勢與對照菌一致
5種工程菌菌體數(shù)量增長趨勢與對照菌一致
,說明工程菌在自然生長狀態(tài)下不會產(chǎn)生自裂解現(xiàn)象。
②上述菌株在LB培養(yǎng)基中生長2h時加入遺傳毒性物質,檢測結果如圖4。據(jù)圖可知,5種工程菌均啟動了對遺傳毒性物質的響應,應選擇工程菌
轉入rec啟動子的菌株
轉入rec啟動子的菌株
作為最優(yōu)檢測菌株。
(4)下列關于該工程菌的敘述,正確的包括
AD
AD
。
A.該工程菌可能用于檢測土壤、蔬菜中的農(nóng)藥殘留量
B.該毒性響應啟動子序列廣泛存在于自然界所有物種中
C.其表達產(chǎn)物可裂解大腸桿菌,檢測后的剩余菌液可直接倒掉
D.為長期保存該工程菌,應加入一定濃度的甘油凍存于-20℃

【答案】RNA聚合酶;轉錄;XhoⅠ和SapⅠ;氨芐青霉素;5種工程菌菌體數(shù)量增長趨勢與對照菌一致;轉入rec啟動子的菌株;AD
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:118引用:9難度:0.6
相似題
  • 1.最近,科學家培育出一種轉基因小鼠,其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并將其分泌到尿液中.這是繼哺乳動物乳腺生物反應器研發(fā)成功后,在膀胱生物反應器研究上另一進展.
    (1)將人的生長激素基因導入小鼠受體細胞,常用的方法是
     
    .所使用到儀器是
     

    (2)在基因工程中,將目的基因與運載體結合時,必須用
     
    酶和
     
    酶.常用的運載體有
     
    、
     
     
    等,而作為運載體必須具備相應的條件,例如應具有
     
    以便進行篩選.進行基因轉移時,通常要將外源基因轉入動物的
     
    中,原因是
     

    (3)通常采用
     
    技術檢測外源基因是否插入了小鼠的基因組中.
    (4)在研究膀胱生物反應器時,應使外源基因在小鼠的
     
    細胞中特異性表達.
    (5)如果將藥物蛋白基因轉入動物如牛、羊的膀胱上皮細胞中,從轉基因牛、羊尿液中提取藥物比從乳汁中提取藥物的更大優(yōu)越性在于
     

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:3引用:1難度:0.3
  • 2.目前,科學家已在牛和山羊等動物乳腺生物反應器中表達出了抗凝血酶、血清白蛋白等多種蛋白類藥物.下列與之相關的說法,正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:5引用:1難度:0.9
  • 3.抗凝血酶是一種天然抗凝血劑,在臨床上被廣泛應用。目前科學家已在豬和羊等動物的乳腺生物反應器中表達出了人的抗凝血酶,如圖是構建抗凝血酶基因表達載體所用的pBR質粒的結構及人抗凝血酶基因所在的DNA片段,回答下列問題:
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    (1)現(xiàn)有以下4種引物,引物A15'-GGACCCCGGG-3';引物B:5'-CATTTCTAGA-3';引物C:5'-CCTGGGGCCC-3';引物D:5'-GTAAAGATCT-3';,利用PCR擴增獲取抗凝血酶基因,應選用引物
     
    (填引物名稱),擴增產(chǎn)物可選擇限制酶
     
    切割后再利用E?coliDNA連接酶連接到pBR質粒上。
    (2)所選用的pBR質粒上含有啟動子,其作用是
     
    ,將構建的基因表達載體先導入大腸桿菌細胞,然后將大腸桿菌涂布到含新霉素的選擇培養(yǎng)基上,長出了多個大腸桿菌菌落,這些菌落并非都是目的菌株,原因是
     
    。
    (3)將篩選得到的目的菌株提取質粒,再通過
     
    方法導入到豬或羊的
     
    細胞內(nèi),通過培養(yǎng)即可獲得能表達人抗凝血酶的乳腺生物反應器。

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:4引用:1難度:0.6
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