維生素A在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為11-順式視黃醛后,與視網(wǎng)膜特定細(xì)胞中的視蛋白結(jié)合成視紫紅質(zhì)。視紫紅質(zhì)接受光信號(hào)后,11-順式視黃醛轉(zhuǎn)變?yōu)槿词揭朁S醛,視紫紅質(zhì)構(gòu)象發(fā)生變化,激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路,最終產(chǎn)生視覺。全反式視黃醛與視蛋白脫離,經(jīng)復(fù)雜的轉(zhuǎn)運(yùn)和酶促反應(yīng),再度轉(zhuǎn)變?yōu)?1-順式視黃醛而被重復(fù)利用。最新研究表明,一種G蛋白偶聯(lián)受體RGR可能參與了視覺產(chǎn)生的某些過程。為研究RGR的作用機(jī)理,某研究小組利用基因工程培育出含RGR反義基因(反義基因是通過原基因反向連接在載體的啟動(dòng)子和終止子之間,其轉(zhuǎn)錄出的mRNA與原基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA互補(bǔ)配對(duì))的轉(zhuǎn)基因小鼠(rgr),研究該基因的功能?;卮鹣铝袉栴}:
(1)為構(gòu)建RGR反義基因重組載體,需先設(shè)計(jì)引物,通過PCR技術(shù)特異性擴(kuò)增RGR基因。為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割,需在引物上添加相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列,即在引物A添加 BamHIBamHI限制酶識(shí)別序列,在引物B添加 EcoRIEcoRI限制酶識(shí)別序列。引物的化學(xué)本質(zhì)一般是 DNADNA。
(2)培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因小鼠過程中,將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞常用的方法是 顯微注射法顯微注射法,常用的受體細(xì)胞是 受精卵受精卵選擇培養(yǎng)基中除有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的必需成分,還需要添加 四環(huán)素四環(huán)素起篩選作用。
(3)研究人員將正常小鼠(WT)和轉(zhuǎn)基因小鼠(rgr)都平均分成兩組,一組在黑暗中飼養(yǎng)12h,另一組在光照下飼養(yǎng)12h;隨后測定小鼠眼睛中11-順式視黃醛、全反式視黃醛和視紫紅質(zhì)的含量,結(jié)果如圖3所示。據(jù)圖分析,光照條件下RGR的作用機(jī)理可能是 RGR通過促進(jìn)全反式視黃醛轉(zhuǎn)化為11-順式視黃醛,進(jìn)而增加視紫紅質(zhì)的形成RGR通過促進(jìn)全反式視黃醛轉(zhuǎn)化為11-順式視黃醛,進(jìn)而增加視紫紅質(zhì)的形成。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】BamHI;EcoRI;DNA;顯微注射法;受精卵;四環(huán)素;RGR通過促進(jìn)全反式視黃醛轉(zhuǎn)化為11-順式視黃醛,進(jìn)而增加視紫紅質(zhì)的形成
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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