利用細(xì)菌靶向給藥在腫瘤治療領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注?？蒲腥藛T改造大腸桿菌，制造出能定點(diǎn)、可控表達(dá)治療性抗體的工程菌。
（1）聚焦超聲能使腫瘤部位的溫度從37℃提升至42℃，可作為工程菌的“溫度開關(guān)”。研究人員篩選出3種轉(zhuǎn)錄抑制蛋白，37℃時，轉(zhuǎn)錄抑制蛋白與誘導(dǎo)型啟動子結(jié)合，抑制下游綠色熒光蛋白（GFP）基因的轉(zhuǎn)錄；42℃時，轉(zhuǎn)錄抑制蛋白空間結(jié)構(gòu)改變，不再與誘導(dǎo)型啟動子結(jié)合。
①研究人員構(gòu)建了圖1所示表達(dá)載體，以篩選最佳感溫元件。除圖中所含元件外，表達(dá)載體還必須具有

復(fù)制原點(diǎn)、標(biāo)記基因、終止子、限制酶酶切位點(diǎn)

復(fù)制原點(diǎn)、標(biāo)記基因、終止子、限制酶酶切位點(diǎn)

等元件。

②檢測導(dǎo)入不同轉(zhuǎn)錄抑制蛋白基因的大腸桿菌在不同溫度下的熒光強(qiáng)度，結(jié)果如圖2和3所示。最終選擇轉(zhuǎn)錄抑制蛋白C來構(gòu)建工程菌，理由是

37℃下熒光強(qiáng)度很低，安全性高；42℃下熒光強(qiáng)度提高倍數(shù)最大，靈敏度高

37℃下熒光強(qiáng)度很低，安全性高；42℃下熒光強(qiáng)度提高倍數(shù)最大，靈敏度高

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（2）上述表達(dá)載體僅在42℃時表達(dá)，而腫瘤治療需要長期進(jìn)行?？蒲腥藛T繼續(xù)對表達(dá)載體進(jìn)行如圖4所示改造，整合酶可將P7序列進(jìn)行一次翻轉(zhuǎn)。請?zhí)顚懴卤?，預(yù)測表中培養(yǎng)條件下，改造后的工程菌菌落的顏色。

培養(yǎng)條件	菌落顏色
37℃培養(yǎng)	無色 無色
42℃培養(yǎng)	綠色 綠色
42℃處理1h后，37℃培養(yǎng)	綠色 綠色

（3）為得到可用于腫瘤治療的工程菌，需進(jìn)一步改造上述工程菌。請選擇圖5中 X、Y、Z三個位點(diǎn)中的一個作為治療性抗體編碼基因的插入位點(diǎn)，并說明選擇理由。

將治療性抗體編碼基因插入X位點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)機(jī)體正常部位不表達(dá)，僅當(dāng)腫瘤部位升溫至42℃后，才激活并持續(xù)表達(dá)，實(shí)現(xiàn)長期、定點(diǎn)的腫瘤治療

將治療性抗體編碼基因插入X位點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)機(jī)體正常部位不表達(dá)，僅當(dāng)腫瘤部位升溫至42℃后，才激活并持續(xù)表達(dá)，實(shí)現(xiàn)長期、定點(diǎn)的腫瘤治療

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