限制酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)如表所示。某質(zhì)粒、目的基因兩端相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)分別如圖1、圖2所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：

限制酶	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

（1）只與一個(gè)五碳糖連接的磷酸基團(tuán)稱為游離的磷酸基團(tuán)，一個(gè)質(zhì)粒分子含有

0

0

個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。圖示質(zhì)粒經(jīng)限制酶Ⅰ完全酶切后產(chǎn)生的DNA片段共含有

4

4

個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。
（2）限制酶Ⅱ能斷開(kāi)的是圖3中

a

a

（填字母）處的鍵。若經(jīng)限制酶Ⅰ切割的DNA末端與經(jīng)限制酶Ⅱ切割的DNA末端連接，則連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為

。對(duì)于連接后的該部位，這兩種酶

都不能

都不能

（填“都能”、“都不能”或“中只有一種能”）將其切開(kāi)。
（3）若用圖中的質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，則應(yīng)選用限制酶

Ⅱ、Ⅳ

Ⅱ、Ⅳ

共同切割，不選用另外兩種限制酶的原因分別是

質(zhì)粒上不含限制酶Ⅲ的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，選用限制酶1可能會(huì)使質(zhì)粒中的啟動(dòng)子丟失（或四環(huán)素基因是標(biāo)記基因之一，若用限制酶I處理質(zhì)粒，則會(huì)使該標(biāo)記基因失去標(biāo)記作用）

質(zhì)粒上不含限制酶Ⅲ的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，選用限制酶1可能會(huì)使質(zhì)粒中的啟動(dòng)子丟失（或四環(huán)素基因是標(biāo)記基因之一，若用限制酶I處理質(zhì)粒，則會(huì)使該標(biāo)記基因失去標(biāo)記作用）

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