銅綠假單胞菌常常引起禽類、水貂等發(fā)生敗血癥及呼吸系統(tǒng)感染等疾病，給養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重損失?？蒲腥藛T嘗試克隆和表達該菌外膜蛋白oprD基因，以用于后期的疫苗研制工作。相關(guān)限制酶識別序列及用于構(gòu)建基因表達載體的質(zhì)粒圖示如圖，其中AmpR表示氨芐青霉素抗性基因，請回答下列問題：
| 限制酶 | 識別序列 |
| BamHⅠ | 5'-G↓GATCC-3' |
| EcoRⅠ | 5'-G↓AATTC-3' |
| NotⅠ | 5'-GC↓GGCCGC-3 |
| XhoⅠ | 5'-C↓TCGAG-3' |
啟動子和終止子
啟動子和終止子
之間才能正確表達。在表達載體中AmpR作為 標記基因
標記基因
。（2）若已知銅綠假單胞菌的oprD基因序列，可利用PCR技術(shù)快速大量擴增該基因，PCR 擴增的原理是
DNA半保留復制
DNA半保留復制
，為使 PCR反應體系中的模板解為單鏈，需要滿足的條件是 加熱（90℃以上）
加熱（90℃以上）
。為便于擴增的oprD基因與表達載體的連接，在設(shè)計引物時，常在兩條引物的 5'
5'
端加上限制酶的識別序列，設(shè)計后的引物如下：引物1：5′-CGGGATCCATGAAAGTGATGAAGTGG-3′
引物2：5′-CCCTCGAGTTACAGGATCGACAGCGG-3′
（3）根據(jù)上題中的引物信息分析，在構(gòu)建oprD基因表達載體時，可選擇
BamHⅠ
BamHⅠ
和 XhoⅠ
XhoⅠ
兩種不同的限制酶同時切割目的基因和質(zhì)粒，以提高目的基因和質(zhì)粒的重組效率。（4）將基因表達載體與經(jīng)
Ca2+
Ca2+
處理 的處于感受態(tài)的受體菌細胞于緩沖液中混合，完成轉(zhuǎn)化過程。將完成轉(zhuǎn)化的受體菌接種在加有 氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養(yǎng)基上初步篩選后，再進-步檢測、鑒定。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】啟動子和終止子；標記基因；DNA半保留復制；加熱（90℃以上）；5'；BamHⅠ；XhoⅠ；Ca2+；氨芐青霉素
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：34引用：2難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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