傳統(tǒng)影像學(xué)診斷在發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移瘤形成時往往已延誤最佳治療時機(jī)。目前可通過液體活檢來檢查血液中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs),用以診斷是否存在癌癥轉(zhuǎn)移,步驟如下:注:上皮組織細(xì)胞來源的CTCs與正常白細(xì)胞表面蛋白質(zhì)的一些差異(如表)
表 細(xì)胞表面抗原標(biāo)志物表達(dá)差異
蛋白種類 細(xì)胞類型 |
CD45 |
EpCAM |
白細(xì)胞 |
有 |
無 |
CTCs |
無 |
有 |
(1)制備單克隆抗體:首先用CD45蛋白對小鼠進(jìn)行免疫,然后經(jīng)過如圖的①、②、③、④等步驟,獲得大量單克隆抗體A;再用EpCAM免疫小鼠,經(jīng)過相同步驟獲得單克隆抗體B。
步驟①涉及到的細(xì)胞工程技術(shù)主要有
動物細(xì)胞融合
動物細(xì)胞融合
和
動物細(xì)胞培養(yǎng)
動物細(xì)胞培養(yǎng)
。
步驟②通常使用選擇培養(yǎng)基,主要目的是篩選出
雜交瘤細(xì)胞
雜交瘤細(xì)胞
。
步驟③主要需要經(jīng)過和抗體檢測,并經(jīng)多次篩選,最終獲得
產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞
產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞
。
步驟④是大規(guī)模培養(yǎng),主要方法有:
體內(nèi)培養(yǎng)
體內(nèi)培養(yǎng)
和
體外培養(yǎng)
體外培養(yǎng)
。體外培養(yǎng)到一定時期的單克隆雜交瘤細(xì)胞會因為
細(xì)胞密度過大、有害代謝物的積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等
細(xì)胞密度過大、有害代謝物的積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等
(至少答出兩點)而分裂受阻,需進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
(2)利用免疫磁珠進(jìn)行分離:取待測人員少量血液于采集管內(nèi),將連接有單克隆抗體
A
A
(填“A”或“B”)的磁珠加入采集管,外加磁場使磁珠定向移動到指定區(qū)域并取出,這樣可以排除非腫瘤細(xì)胞的干擾;再將連接有單克隆抗體
B
B
(填“A”或“B”)的磁珠加入采集管,外加磁場使磁珠定向移動到指定區(qū)域取出,收集CTCs。
(3)計數(shù)并診斷:若出現(xiàn)
CTCs陽性
CTCs陽性
(細(xì)胞)數(shù)量超出正常范圍,即可診斷發(fā)生癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。