稻田生物固氮作用是稻田氮素循環(huán)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，某些藍(lán)細(xì)菌是自生固氮菌（獨(dú)立生活時(shí)能夠利用空氣中游離的氮分子作為氮源，并將氮分子轉(zhuǎn)化為氨，氨轉(zhuǎn)化為銨鹽后是植物良好的氮素營養(yǎng)）。藍(lán)細(xì)菌中B基因表達(dá)的B蛋白是一種有助于藍(lán)細(xì)菌高效吸收的載體蛋白，科學(xué)家利用基因工程和細(xì)胞工程等技術(shù)，嘗試將藍(lán)細(xì)菌的B基因?qū)胨炯?xì)胞，以期獲得吸收能力較強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因水稻，從而增加糧食產(chǎn)量。圖1、2分別是農(nóng)桿菌的T質(zhì)粒和藍(lán)細(xì)菌B基因的結(jié)構(gòu)模式圖。回答下列有關(guān)問題：

（1）為獲得可用于進(jìn)一步研究的固氮藍(lán)細(xì)菌的菌株，該培養(yǎng)基所需的營養(yǎng)物質(zhì)有無機(jī)碳源、

水、無機(jī)鹽

水、無機(jī)鹽

（寫兩種），但不需要添加

氮源

氮源

營養(yǎng)物質(zhì)，并在有光條件下培養(yǎng)。
（2）利用PCR技術(shù)以圖2中的DNA片段為模板擴(kuò)增B基因時(shí)，需要的引物有

引物B和引物C

引物B和引物C

（填寫圖中引物代號(hào)）。
（3）在構(gòu)建含B基因的表達(dá)載體時(shí)，需要用限制酶

BclⅠ和HindⅢ

BclⅠ和HindⅢ

切割Ti質(zhì)粒和B基因，不選用其他限制酶的原因是

BamHⅠ會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因（和氨芐青霉素抗性基因），Sau3AⅠ不能切割Ti質(zhì)粒

BamHⅠ會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因（和氨芐青霉素抗性基因），Sau3AⅠ不能切割Ti質(zhì)粒

。實(shí)踐中，雙酶切與單酶切相比，優(yōu)點(diǎn)是

防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及質(zhì)粒和目的基因的反向連接

防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及質(zhì)粒和目的基因的反向連接

。
（4）為檢測(cè)B基因在轉(zhuǎn)基因水稻細(xì)胞中是否成功表達(dá)，可采用抗原一抗體雜交法在分子水平上檢測(cè)，還可以在個(gè)體水平上檢測(cè)，請(qǐng)寫出個(gè)體水平檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)思路：

將等量的生長狀態(tài)相同的普通水稻和轉(zhuǎn)基因水稻，分別置于含相同濃度的

NO

-

3

完全培養(yǎng)液中，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，檢測(cè)并比較兩組培養(yǎng)液中

NO

-

3

的剩余量（或測(cè)定兩組水稻根系吸收

NO

-

3

的速率）

將等量的生長狀態(tài)相同的普通水稻和轉(zhuǎn)基因水稻，分別置于含相同濃度的

NO

-

3

完全培養(yǎng)液中，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，檢測(cè)并比較兩組培養(yǎng)液中

NO

-

3

的剩余量（或測(cè)定兩組水稻根系吸收

NO

-

3

的速率）

。