大腸桿菌是水體中常見的微生物，經(jīng)改造的大腸桿菌可用來檢測制藥廠排出的污水中某化合物X（一種遺傳毒性雜質(zhì)，可損傷細(xì)胞DNA，具有致癌可能）的含量。
（1）大腸桿菌在含有伊紅—亞甲藍(lán)的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中生長，菌落呈深紫色并有金屬光澤，據(jù)此可用于檢測污染水體中大腸桿菌的數(shù)量。上述培養(yǎng)基是否屬于選擇培養(yǎng)基

不屬于

不屬于

，說明理由

在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中很多細(xì)菌能正常生長繁殖，不能抑制或阻止除大腸桿菌之外的其他微生物的生長

在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中很多細(xì)菌能正常生長繁殖，不能抑制或阻止除大腸桿菌之外的其他微生物的生長

。
（2）圖1中甲、乙、丙、丁是從微生物中分離到的可被化合物X激活的4種毒性響應(yīng)基因啟動子（箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向）；圖2質(zhì)粒中SPP基因的表達(dá)產(chǎn)物可使大腸桿菌等細(xì)菌裂解。將4種啟動子分別插入質(zhì)粒的P區(qū)，以構(gòu)建表達(dá)載體，導(dǎo)入大腸桿菌可獲得對化合物X敏感的工程菌。
①經(jīng)PCR反應(yīng)體系擴(kuò)增啟動子片段時，DNA聚合酶只能從核苷酸鏈的

3'端

3'端

（選填“5'端”或“3'端”）開始延伸DNA鏈。除引物外，PCR反應(yīng)體系中還包含緩沖液、模板DNA、

dNTP

dNTP

和

耐高溫DNA聚合酶

耐高溫DNA聚合酶

等成分。
②為使4種啟動子正確插入到質(zhì)粒上，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增啟動子時，需分別在4種啟動子A端和B端添加限制酶

XhoI

XhoI

和

SapI

SapI

的酶切位點(diǎn)。
③為初步檢測表達(dá)載體是否構(gòu)建成功，可用上述兩種限制酶對質(zhì)粒和4種表達(dá)載體進(jìn)行切割，然后對酶切產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，檢測結(jié)果如圖3所示。由此可初步判定表達(dá)載體的構(gòu)建

成功

成功

。（填“成功”或“不成功”）
④作為受體細(xì)胞的大腸桿菌能在

含化合物X

含化合物X

的培養(yǎng)液中生長。
（3）將獲得的工程菌甲、乙、丙、丁和對照菌分別培養(yǎng)在細(xì)菌培養(yǎng)液中，2小時后在培養(yǎng)液中加入化合物X繼續(xù)培養(yǎng)，檢測細(xì)菌的密度，結(jié)果如圖4所示。
①實(shí)驗(yàn)中的對照菌是

導(dǎo)入空質(zhì)粒的大腸桿菌

導(dǎo)入空質(zhì)粒的大腸桿菌

。
②實(shí)驗(yàn)中對細(xì)菌密度的統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)為

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

。
③據(jù)圖4可知，4種工程菌均啟動了對化合物X的響應(yīng)，判斷的依據(jù)是

在加入化合物X前，4種工程菌的生長情況與對照菌無明顯差異，加入化合物X后，4種工程菌的菌體密度顯著低于對照菌

在加入化合物X前，4種工程菌的生長情況與對照菌無明顯差異，加入化合物X后，4種工程菌的菌體密度顯著低于對照菌

。