四尾柵藻是一種淡水藻類，繁殖快、適應(yīng)性強(qiáng)，可作為制備生物柴油的重要原料之一。為提高四尾柵藻油脂含量，研究人員將從含油量高的紫蘇中獲得的二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶基因（DGAT1）與pBI121質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)載體，經(jīng)轉(zhuǎn)化成功獲得高產(chǎn)油脂四尾柵藻，主要研究過(guò)程如圖，其中DGAT1-F（5'-GCATCTAGAATGGCGATCTTGGACTC-3'）和DGAT1-R（5'-CGGATCCCTACCTTGCACTAGCTTTTC-3'）是以DGAT1基因?yàn)橐罁?jù)設(shè)計(jì)的一對(duì)引物，1acZ基因編碼產(chǎn)物在X-ga1和IPTG存在下，可以產(chǎn)生藍(lán)色沉淀，使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落呈現(xiàn)白色。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。
?
| 限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn) | |
| BamHⅠ | 5′G↓GATCC3′ |
| SacⅠ | 5′GAGCT↓C3′ |
| XbaⅠ | 5′T↓CTAGA3′ |
| EcoRⅠ | 5′G↓AATTC3′ |
逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶
逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶
，過(guò)程②應(yīng)選用的限制酶是 BamHⅠ
BamHⅠ
和 XbaⅠ
XbaⅠ
。（2）研究中，在保存DGAT1基因時(shí)，將克隆載體導(dǎo)入大腸桿菌的優(yōu)點(diǎn)有
①②④
①②④
。①穩(wěn)定保存
②準(zhǔn)確復(fù)制
③快速表達(dá)
④方便取用
（3）過(guò)程③經(jīng)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌通過(guò)
稀釋涂布平板法
稀釋涂布平板法
（方法）接種到培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。為篩選獲得目標(biāo)菌株，培養(yǎng)基應(yīng)加入的成分有 氨芐青霉素、X-gal、IPTG
氨芐青霉素、X-gal、IPTG
。（4）為檢測(cè)表達(dá)載體轉(zhuǎn)化四尾柵藻的情況及確定目的基因是否表達(dá)，研究人員進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)完成表。
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 簡(jiǎn)要操作過(guò)程 |
| 初篩培養(yǎng) | 經(jīng)轉(zhuǎn)化后的四尾柵藻接種于含① 卡那霉素 卡那霉素 的BG11固體培養(yǎng)基并放置于人工氣候箱培養(yǎng)，一段時(shí)間后觀察其生長(zhǎng)情況 |
| ② 擴(kuò)大培養(yǎng) 擴(kuò)大培養(yǎng) |
在BG11固體培養(yǎng)基上分別挑取數(shù)個(gè)單藻落接種至BG11液體培養(yǎng)基中光照搖床培養(yǎng)，編號(hào)備用 |
| PCR驗(yàn)證 | 收集四尾柵藻藻體，提取基因組DNA，以DGAT1-F和DGAT1-R為引物，進(jìn)行PCR驗(yàn)證，未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻作對(duì)照 |
| 油脂含量測(cè)定 | 利用索氏抽提法分別測(cè)定③ 等量的轉(zhuǎn)化后和未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻 等量的轉(zhuǎn)化后和未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻 的油脂含量 |
| 結(jié)果處理 | 統(tǒng)計(jì)并比較PCR驗(yàn)證結(jié)果及藻體中油脂的含量 |
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合；微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶；BamHⅠ；XbaⅠ；①②④；稀釋涂布平板法；氨芐青霉素、X-gal、IPTG；卡那霉素；擴(kuò)大培養(yǎng)；等量的轉(zhuǎn)化后和未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/7/13 8:0:9組卷：19引用：1難度：0.6
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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