19世紀(jì)末，巴斯德開創(chuàng)了第一次疫苗革命，其特點(diǎn)是接種滅活或減毒的病原微生物。20世紀(jì)70年代開始，現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展開創(chuàng)了第二次疫苗革命，使疫苗的研制進(jìn)入分子水平。圖1是通過基因工程制備乙型肝炎表面抗原（HbsAg）從而獲得乙肝疫苗的過程。

在圖1步驟①和③中，需要用合適的限制酶切割乙肝表面抗原基因和質(zhì)?！，F(xiàn)將乙肝表面抗原基因及質(zhì)粒的部分限制酶的識(shí)別序列及位置表示為圖2。質(zhì)粒中的啟動(dòng)子是質(zhì)粒中基因得以正常表達(dá)所必需的部分。LacZ基因合成某種酶，該酶能將無色染料X-gal變成藍(lán)色，最終能在含無色染料X-gal的培養(yǎng)基上將含該基因的菌落染成藍(lán)色。

限制酶	EcoRⅠ	BclⅠ	BamHⅠ	HindⅢ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	5'-G↓AATTC-3'	5'-T↓GATCA-3'	5'-G↓GATCC-3'	5'-A↓AGCTT-3'

（1）制備基因疫苗的基因除了可以通過PCR技術(shù)擴(kuò)增外，也可以通過

人工合成

人工合成

的方法中獲取。
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，常選擇質(zhì)粒作為運(yùn)載體，這是因?yàn)橘|(zhì)粒具有

具有較小的分子量

具有較小的分子量

等特點(diǎn)（至少答出1點(diǎn)）。一個(gè)基因表達(dá)載體的組成，除了目的基因和復(fù)制原點(diǎn)，還必須有啟動(dòng)子、

終止子

終止子

（至少答出1個(gè)）。
（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，切割質(zhì)粒選用的限制酶是BamHⅠ和HinlⅢ，切割乙肝表面抗原基因選用的限制酶是

BclⅠ

BclⅠ

和

HindⅢ

HindⅢ

。與只用一種限制酶相比，這樣操作的優(yōu)勢(shì)是

避免自身環(huán)化

避免自身環(huán)化

及便于篩選。在圖1步驟④中，使用的基因工程工具酶是

DNA連接酶

DNA連接酶

。
（4）為篩選含有乙肝表面抗原的大腸桿菌細(xì)胞，需要將導(dǎo)入操作之后的大腸桿菌接種到含

氨芐青霉素

氨芐青霉素

和無色染料X-gal的固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，挑選

白色或未被染成藍(lán)色

白色或未被染成藍(lán)色

（填“顏色”）的菌落純化培養(yǎng)。
（5）若運(yùn)用PCR技術(shù)檢測(cè)乙肝表面抗原基因是否導(dǎo)入，需根據(jù)

目的基因

目的基因

的序列設(shè)計(jì)PCR引物，利用待檢DNA為模板進(jìn)行PCR、PCR過程包括多次循環(huán)，每個(gè)循環(huán)分為3個(gè)步驟：①變性、②

復(fù)性

復(fù)性

、③延伸。
（6）乙肝表面抗原基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，常用

抗原—抗體雜交技術(shù)

抗原—抗體雜交技術(shù)

技術(shù)檢測(cè)乙肝表面抗原在大腸桿菌中是否成功表達(dá)。