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血凝素基因(HA)編碼的血凝素是構(gòu)成流感病毒囊膜纖突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2兩個亞單位,其中HA1含有病毒與受體相互作用的位點。IgGFc基因片段(長度為717bp)編碼人IgG抗體中的一段小肽,常作為融合蛋白標簽。蛋白質(zhì)分泌依賴于信號肽的引導,本研究中用信號肽IL-2SS代替HA自身信號肽,科研人員嘗試構(gòu)建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達載體,并導入大腸桿菌表達和分泌,請回答:
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(1)流感病毒囊膜主要由
磷脂和蛋白質(zhì)
磷脂和蛋白質(zhì)
組成,囊膜上血凝素的合成場所在
宿主細胞的核糖體
宿主細胞的核糖體
。
(2)本實驗用信號肽IL-2SS代替HA自身信號肽有利于
融合蛋白分泌到大腸桿菌細胞外
融合蛋白分泌到大腸桿菌細胞外
,PCR擴增目的基因時應該選擇圖中引物
b和引物c
b和引物c
設(shè)計引物時,不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列,原因是
防止產(chǎn)生的HA上不含IgGFc標簽
防止產(chǎn)生的HA上不含IgGFc標簽

(3)應選擇限制酶
EcoRV
EcoRV
來切割質(zhì)粒A,然后直接將PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒A混合,同時加入
T4DNA連接
T4DNA連接
酶,使得目的基因與質(zhì)粒A相連。
(4)若目的基因與質(zhì)粒A正向連接,HA1基因轉(zhuǎn)錄時的模板鏈是由圖中的引物
c
c
(填“a”、“b”、“c”或“d”)在PCR時延伸而成;若目的基因與質(zhì)粒A反向連接,用BamHⅠ和SacⅠ同時切割重組質(zhì)粒,完全酶切后的產(chǎn)物進行凝膠電泳,其中最靠近加樣孔的條帶長度約為
5181
5181
bp。
(5)融合蛋白中的標簽蛋白有利于目的蛋白的分離和純化,基因工程生產(chǎn)HA1作為疫苗時,選擇人IgGFc作為標簽的優(yōu)點還有
降低免疫排斥反應
降低免疫排斥反應
。

【答案】磷脂和蛋白質(zhì);宿主細胞的核糖體;融合蛋白分泌到大腸桿菌細胞外;b和引物c;防止產(chǎn)生的HA上不含IgGFc標簽;EcoRV;T4DNA連接;c;5181;降低免疫排斥反應
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:27引用:1難度:0.6
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    發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6
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    限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ
    識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG
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    發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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