甜玉米與普通玉米相比,甜玉米中可溶性糖向淀粉的轉(zhuǎn)化較慢,含可溶性糖量高,汁多質(zhì)脆,富含多種維生素。為了使甜玉米更富有生產(chǎn)應(yīng)用價值,科研人員通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了超量表達(dá)P蛋白轉(zhuǎn)基因甜玉米。在超量表達(dá)P基因載體的構(gòu)建中,所用DNA片段和Ti質(zhì)粒的酶切位點如圖所示。
說明:強(qiáng)啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段;BamHⅠ、HindⅢ、EcoRⅠ、NotⅠ、SacⅠ代表不同的限制酶;T-DNA是農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的DNA片段。
(1)為了特異性擴(kuò)增P基因序列,可采用 PCRPCR的方法,一般要加入的原料為 dNTPdNTP。
(2)強(qiáng)啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,能被 RNA聚合酶RNA聚合酶識別并結(jié)合,驅(qū)動基因的持續(xù)轉(zhuǎn)錄。
(3)構(gòu)建能超量表達(dá)P基因的載體,需選用 BamHⅠ和SacⅠBamHⅠ和SacⅠ限制酶的組合和DNA連接酶。將重組Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌,需先將農(nóng)桿菌用 CaCl2溶液CaCl2溶液處理。
(4)將玉米愈傷組織經(jīng)農(nóng)桿菌液浸泡,超量表達(dá)P基因會隨T-DNA 整合到玉米細(xì)胞的染色體DNA上整合到玉米細(xì)胞的染色體DNA上,從而獲得轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞。繼而進(jìn)行植物組織培養(yǎng),培養(yǎng)基中需加入 潮霉素潮霉素進(jìn)行篩選,篩選出的愈傷組織經(jīng) 再分化再分化過程形成叢芽,然后在 生長素生長素(填激素名稱)較多的培養(yǎng)基上形成根,最終獲得多個玉米株系。發(fā)現(xiàn)某株系的P蛋白表達(dá)量較低,請對該現(xiàn)象作出合理的解釋:該株系玉米中可能沒有導(dǎo)入目的基因或目的基因未表達(dá)該株系玉米中可能沒有導(dǎo)入目的基因或目的基因未表達(dá)。
【考點】基因工程的操作過程綜合;植物的組織培養(yǎng).
【答案】PCR;dNTP;RNA聚合酶;BamHⅠ和SacⅠ;CaCl2溶液;整合到玉米細(xì)胞的染色體DNA上;潮霉素;再分化;生長素;該株系玉米中可能沒有導(dǎo)入目的基因或目的基因未表達(dá)
【解答】
【點評】
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