普通棉花中含β甘露糖苷酶基因（ChMmaA2），能在纖維細(xì)胞中特異性表達(dá)，產(chǎn)生的β甘露糖苷酶催化半纖維素降解，棉纖維長(zhǎng)度變短。為了培育新的棉花品種，科研人員構(gòu)建了反義GhMnaA2基因表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入棉花細(xì)胞，成功獲得轉(zhuǎn)基因棉花品種，具體過(guò)程如圖。請(qǐng)分析回答：
（1）纖維細(xì)胞E6啟動(dòng)子的元素組成為
C、H、O、N、P
C、H、O、N、P
，基因表達(dá)載體除了圖示組成外，至少還有 復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因
復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因
等（至少答兩個(gè)），不能使用質(zhì)粒1中花椰菜病毒啟動(dòng)子的原因是 纖維細(xì)胞中的RNA聚合酶不能識(shí)別和結(jié)合花椰菜病毒啟動(dòng)子，反義GhMnaA2不能轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA
纖維細(xì)胞中的RNA聚合酶不能識(shí)別和結(jié)合花椰菜病毒啟動(dòng)子，反義GhMnaA2不能轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA
。
（2）PCR技術(shù)擴(kuò)增β-甘露糖苷酶基因需要根據(jù) GhMnaA2兩端部分核苷酸序列
GhMnaA2兩端部分核苷酸序列
設(shè)計(jì)特異性引物序列，假設(shè)開(kāi)始時(shí)模板DNA數(shù)量為m個(gè)，PCR擴(kuò)增5個(gè)循環(huán)，理論上需要的引物數(shù)量 62m
62m
，只含目的基因的片段數(shù)量為 22m
22m
。為保證ChMnaA2能插入到質(zhì)粒2中，還需要在引物的 5′
5′
端添加限制酶識(shí)別序列。
（3）為什么不能用GhMnaA2探針進(jìn)行DNA分子雜交來(lái)鑒定基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入棉花細(xì)胞？因?yàn)槊藁?xì)胞中本來(lái)就有GhMnaA2，不管是否導(dǎo)入都能與該探針發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)
因?yàn)槊藁?xì)胞中本來(lái)就有GhMnaA2，不管是否導(dǎo)入都能與該探針發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)
。
（4）③過(guò)程中用酶切法可鑒定正、反義表達(dá)載體。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切割正義基因表達(dá)載體獲得0.1kb、3.2kb、5.8kb、8.6kb四種長(zhǎng)度的DNA片段，則用NotI酶切反義基因表達(dá)載體獲得DNA片段的長(zhǎng)度應(yīng)是 5.9kb
5.9kb
和 11.8kb
11.8kb
。
（5）導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纖維變長(zhǎng)的原理是 反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對(duì)，從而抑制基因的表達(dá)（翻譯）
反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對(duì)，從而抑制基因的表達(dá)（翻譯）
。
