大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌，因此對其研究至關(guān)重要。為觀察大麗輪枝菌對棉花根的侵染路徑，研究人員通過基因工程培育出了表達綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因菌株。圖1是其主要過程，分析回答：
（1）據(jù)圖1分析，過程①表示利用 PCRPCR技術(shù)獲取和擴增兩端含有酶切位點的綠色熒光蛋白基因（sGFP），為保證sGFP正確插入到質(zhì)粒中，還需要在目的基因兩端添加 HindⅢ和BamHⅠHindⅢ和BamHⅠ限制酶的識別序列。
（2）過程②表示基因工程的第二個步驟：目的基因表達載體的構(gòu)建目的基因表達載體的構(gòu)建。首先需要利用上述兩種限制酶對sGFP片段和質(zhì)粒進行剪切，圖中質(zhì)粒大片段的左端產(chǎn)生的黏性末端為 （5′→3′）為AGCT（5′→3′）為AGCT。然后利用 DNA連接酶DNA連接酶進行重組質(zhì)粒的連接。
（3）此研究中利用 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將sGPP導(dǎo)入大麗輪枝菌。為了獲得所需的農(nóng)桿菌，可用 CaCl2CaCl2處理農(nóng)桿菌，然后將重組質(zhì)粒導(dǎo)入其中，接著在含有 潮霉素潮霉素的選擇培養(yǎng)基上進行篩選，利用 平板劃線法或稀釋涂布平板平板劃線法或稀釋涂布平板法進行接種，培養(yǎng)后獲得菌落。
（4）選擇不同的農(nóng)桿菌菌落，分別提取細菌質(zhì)粒DNA，并用上述限制酶完全酶切后電泳，結(jié)果如圖2，請判斷 第2第2泳道為重組質(zhì)粒的酶切結(jié)果，判斷依據(jù)是 泳道2中除了質(zhì)粒大片段外，另外的DNA片段的長度與目的基因的相同泳道2中除了質(zhì)粒大片段外，另外的DNA片段的長度與目的基因的相同。
（5）在獲得高表達的轉(zhuǎn)基因大麗輪枝菌后，將其接種到棉花根部，通過持續(xù)觀察 綠色熒光蛋白出現(xiàn)的位置可確定其對棉花根部的侵染路徑綠色熒光蛋白出現(xiàn)的位置可確定其對棉花根部的侵染路徑 以確定其對棉花根部的侵染路徑，為棉花黃萎病的治療提供依據(jù)。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】PCR；HindⅢ和BamHⅠ；目的基因表達載體的構(gòu)建；（5′→3′）為AGCT；DNA連接酶；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化；CaCl2；潮霉素；平板劃線法或稀釋涂布平板；第2；泳道2中除了質(zhì)粒大片段外，另外的DNA片段的長度與目的基因的相同；綠色熒光蛋白出現(xiàn)的位置可確定其對棉花根部的侵染路徑
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：20引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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