為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，沿海灘涂鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國科學(xué)家應(yīng)用耐鹽堿基因培育出了耐鹽堿水稻新品系。請據(jù)圖回答下列問題：

限制酶	AluⅠ	EcoRⅠ	PatⅠ	SmaⅠ
切割位點(diǎn)	AG↓CT TC↑GA	G↓AATTC CTTAA↑G	CTGCA↓G G↑ACGTC	CCC↓GGG GGG↑CCC

表2 幾種限制酶識別序列及切割位點(diǎn)表
（1）限制酶主要是從

原核生物（或微生物）

原核生物（或微生物）

生物中獲得，其特點(diǎn)是能夠識別DNA分子某種

特定的核苷酸序列

特定的核苷酸序列

，并在特定位點(diǎn)切割。
（2）獲取真核生物的基因通常采用人工合成法，通過圖示中①方法合成的耐鹽堿基因中是不含

啟動子和終止子

啟動子和終止子

的，如果要將耐鹽堿基因和質(zhì)粒重組，應(yīng)該在基因兩側(cè)的A和B位置除了接上以上兩個結(jié)構(gòu)外還需分別加入

EcoRⅠ和SmaI

EcoRⅠ和SmaI

限制酶識別序列，這樣設(shè)計的優(yōu)點(diǎn)是避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化以及定向連接。
（3）過程②采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，在PCR反應(yīng)體系的主要成分中應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和引物Ⅰ和引物Ⅱ，若在該反應(yīng)體系中，目的基因擴(kuò)增了4代，則共用了引物Ⅰ

15

15

個。
（4）PCR反應(yīng)中溫度呈現(xiàn)周期性變化，其中加熱到90～95℃的目的是

解鏈（變性、解旋、受熱變性后解鏈為單鏈）

解鏈（變性、解旋、受熱變性后解鏈為單鏈）

，然后冷卻到55-60℃使引物與互補(bǔ)DNA鏈結(jié)合，繼續(xù)加熱到70～75℃，目的是

在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸（Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成）

在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸（Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成）

。
（5）在步驟⑤⑥過程中都需用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理兩類細(xì)菌。為了確認(rèn)目的基因通過⑦過程導(dǎo)入植物細(xì)胞中后是否成功表達(dá)目的蛋白質(zhì)，通常從分子水平進(jìn)行檢測的方法是用

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

法。
（6）假設(shè)該抗鹽堿基因D，通過基因工程導(dǎo)入水稻后連接到水稻的一條染色體上，則該水稻進(jìn)行減數(shù)分裂的細(xì)胞在聯(lián)會時有

2

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個D基因。