蛋白質(zhì)是生命活動不可缺少的物質(zhì)。隨著人類基因組計劃的進展以及多種生物基因組測序工作的完成,人類跨入了后基因組和蛋白質(zhì)組時代。血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分,負責血液中氧氣和二氧化碳的運輸。
(1)分離血紅蛋白的方法是凝膠色譜法,其原理是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小相對分子質(zhì)量的大小來分離蛋白質(zhì)。
(2)在血紅蛋白樣品處理和粗分離中需要用到很多試劑,如在紅細胞的洗滌中需要用到生理鹽水直至上清液不再呈現(xiàn)黃色;在血紅蛋白的釋放過程中需用到蒸餾水和40%體積的甲苯甲苯,目的是使紅細胞破裂釋放血紅蛋白;在透析過程中需要將透析袋放入200mol/L的磷酸緩沖液磷酸緩沖液中。
(3)本實驗用的是交聯(lián)葡聚糖凝膠(Sephadex G-75),其中“G”表示凝膠的交聯(lián)程度,膨脹程度及分離范圍凝膠的交聯(lián)程度,膨脹程度及分離范圍,“75”表示凝膠得水值,即每克凝膠膨脹時吸收水分7.5g。在裝填凝膠時色譜柱內(nèi)不能出現(xiàn)氣泡的原因是因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序,降低分離程度因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序,降低分離程度,給色譜柱添加樣品的方法是使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。
(4)判斷純化的蛋白質(zhì)是否達到要求,選用的檢測方法是SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。
【答案】相對分子質(zhì)量的大小;甲苯;磷酸緩沖液;凝膠的交聯(lián)程度,膨脹程度及分離范圍;因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序,降低分離程度;使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動;SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
【解答】
【點評】
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