酵母雙雜交技術(shù)是篩選能與已知蛋白互作的蛋白質(zhì)的方法，其主要原理如圖1。黃瓜花葉病毒（CMV）可侵染200多種植物，病毒的外殼蛋白（CMVCP）直接參與病毒的細胞間轉(zhuǎn)移、癥狀表現(xiàn)等。研究人員利用酵母雙雜交技術(shù)，從CMV感染的番茄葉片cDNA文庫中篩選出CMVCP互作蛋白基因，圖2為構(gòu)建CMVCP誘餌載體（能表達出BD-CP融合蛋白）的流程。請據(jù)圖回答下列問題。
（1）圖1中，獲得BD-X蛋白的關(guān)鍵是將相應(yīng)序列連接形成融合基因，融合基因獲得過程屬于 基因突變基因突變（變異類型）。X與Y的結(jié)合能使轉(zhuǎn)錄因子的BD和AD同時結(jié)合到啟動子上，進而招募酶x催化LacZ基因的轉(zhuǎn)錄，酶X是 RNA聚合酶RNA聚合酶。
（2）圖2中，過程①提取總RNA時選擇有明顯感染癥狀葉片的原因是 癥狀明顯葉片細胞中含有大量CMV病毒，有豐富的CP基因癥狀明顯葉片細胞中含有大量CMV病毒，有豐富的CP基因。過程②中通常利用RT-PCR技術(shù)獲得cDNA，上述技術(shù)中不同循環(huán)次數(shù)的擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖3，則最適宜的循環(huán)次數(shù)是 1818次，依據(jù)是 2號條帶比1號條帶寬，而3號條帶較彌散（或2號條帶明亮、整齊）2號條帶比1號條帶寬，而3號條帶較彌散（或2號條帶明亮、整齊）。
（3）圖2過程③構(gòu)建誘餌載體時，為保證CPcDNA能定向插入到指定位置，需要在過程②設(shè)計PCR引物時，在兩種引物的5'端分別添加BamH I和EcoR I識別序列在兩種引物的5'端分別添加BamH I和EcoR I識別序列。用獲得的誘餌載體先轉(zhuǎn)化大腸桿菌，再用 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法將菌液接種到含 卡那霉素卡那霉素的選擇培養(yǎng)基上，挑取陽性單菌落細胞進行測序，確認插入的基因序列正確。
（4）獲得CMVCP誘餌載體轉(zhuǎn)化的酵母菌后，研究人員進一步開展CMVCP互作蛋白的篩選研究，其主要實驗流程是：構(gòu)建感染CMV的番茄cDNA文庫→構(gòu)建一系列靶蛋白載體→分別將靶蛋白載體導(dǎo)入誘餌載體轉(zhuǎn)化后酵母分別將靶蛋白載體導(dǎo)入誘餌載體轉(zhuǎn)化后酵母→接種培養(yǎng)，獲取呈 藍藍色的菌落細胞→篩選、鑒定互作蛋白。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】基因突變；RNA聚合酶；癥狀明顯葉片細胞中含有大量CMV病毒，有豐富的CP基因；18；2號條帶比1號條帶寬，而3號條帶較彌散（或2號條帶明亮、整齊）；在兩種引物的5'端分別添加BamH I和EcoR I識別序列；稀釋涂布平板；卡那霉素；分別將靶蛋白載體導(dǎo)入誘餌載體轉(zhuǎn)化后酵母；藍
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：28引用：1難度：0.5
相似題
-
1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
把好題分享給你的好友吧~~