噬菌體抗體庫技術(shù)可以制備單克隆抗體，其方法是將人的抗體基因插入噬菌體載體，以大腸桿菌作為受體細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)?？贵w可能以與外殼蛋白融合表達(dá)的形式位于噬菌體表面，也可能以分泌表達(dá)的方式胞外排出?；卮鹣铝袉栴}：
（1）獲取人的抗體基因可從活化的B細(xì)胞中提取人的抗體基因的mRNA人的抗體基因的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，再利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。擴(kuò)增時，反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是將溫度加熱至90℃～95℃將溫度加熱至90℃～95℃。
（2）體外重組的質(zhì)?？赏ㄟ^Ca2+參與的轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化方法導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞；而體外重組的噬菌體DNA，理論上可以不利用Ca2+處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，依據(jù)是噬菌體可以侵染大腸桿菌，可將重組DNA分子注入大腸桿菌噬菌體可以侵染大腸桿菌，可將重組DNA分子注入大腸桿菌。
（3）真核生物基因（目的基因）在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的蛋白質(zhì)可能會被降解。為防止抗體被降解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用蛋白酶缺陷型蛋白酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細(xì)胞。
（4）從噬菌體抗體庫中篩選特異性抗體的方法是抗原-抗體雜交技術(shù)抗原-抗體雜交技術(shù)，其原理是抗原和抗體特異性結(jié)合抗原和抗體特異性結(jié)合。與利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體相比，噬菌體抗體庫技術(shù)省去了動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合操作，使制備的流程更簡單。
【考點(diǎn)】單克隆抗體及其應(yīng)用．
【答案】人的抗體基因的mRNA；將溫度加熱至90℃～95℃；轉(zhuǎn)化；噬菌體可以侵染大腸桿菌，可將重組DNA分子注入大腸桿菌；蛋白酶缺陷型；抗原-抗體雜交技術(shù)；抗原和抗體特異性結(jié)合；動物細(xì)胞融合
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：11引用：1難度：0.6
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1．為實(shí)現(xiàn)對肝癌的有效治療，研究人員通過比較肝腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞間的差異，篩選有效的免疫治療靶點(diǎn)，制備相應(yīng)單克隆抗體并構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物。
（1）檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的CLDN6蛋白能夠促進(jìn)腫瘤發(fā)生，選定其作為單克隆抗體的作用靶點(diǎn)。CLDN6蛋白是一個跨膜蛋白，包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，制備免疫小鼠所用的抗原時，應(yīng)提取區(qū)基因序列用于設(shè)計抗原。
（2）將CLDN6蛋白抗原注射到小鼠體內(nèi)，從該小鼠脾臟中獲取細(xì)胞，誘導(dǎo)其與骨髓瘤細(xì)胞融合，利用篩選得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體陽性檢測，多次篩選得到產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，最終通過體內(nèi)或體外培養(yǎng)獲得大量單克隆抗體。
（3）將該單克隆抗體與抗癌藥物DMI 結(jié)合構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物（CLDN6-DMI）。用不同濃度的游離DMI、CLDN6-DMI或lgG-DMI（無關(guān)抗體-DMI）分別處理高表達(dá)CLDN6細(xì)胞和低表達(dá)CLDN6細(xì)胞，檢測細(xì)胞活力，結(jié)果如圖1：
由圖可知，CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達(dá)CLDN6細(xì)胞，依據(jù)是。
（4）如圖2表示抗體—藥物偶聯(lián)物CLDN6-DMI的作用機(jī)制：由圖分析，CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達(dá)CLDN6細(xì)胞的原因是。發(fā)布：2024/12/19 7:0:1組卷：3引用：1難度：0.6 -
2．為減少鼠源單克隆抗體可能引起的副作用，某研究團(tuán)隊(duì)對鼠源單克隆抗體F進(jìn)行改造，制備了人—鼠嵌合抗體F′，具體流程為：提取鼠源雜交瘤細(xì)胞RNA，逆轉(zhuǎn)錄后通過PCR擴(kuò)增抗體F的基因序列，將其部分序列用人的相應(yīng)抗體基因序列進(jìn)行替換，再構(gòu)建表達(dá)載體，在體外制備人﹣鼠嵌合抗體F′。為檢測抗體性質(zhì)，他們測定了F′單獨(dú)與抗原作用時對抗原的結(jié)合能力以及F′和F同時與抗原作用（F′與F初始濃度相同）時F′對抗原的結(jié)合能力，結(jié)果如下圖所示。下列敘述錯誤的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202304/369/62ee43c5.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/19 1:0:1組卷：39引用：4難度：0.5 -
3．2020年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎授予發(fā)現(xiàn)丙肝病毒的三位科學(xué)家。丙肝病毒引起的丙型肝炎可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。如圖為利用小鼠甲為實(shí)驗(yàn)材料研制丙肝病毒的單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)流程。下列敘述錯誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/19 6:0:1組卷：42引用：2難度：0.6
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