神經(jīng)生長因子（NGF）對神經(jīng)細胞的增殖和分化有重要作用，對非神經(jīng)性細胞的生長和活性有輔助作用，對神經(jīng)性和非神經(jīng)性疾病都有良好的潛在治療作用?？蒲腥藛T通過轉(zhuǎn)基因方法制備能在腮腺中特異性表達人源神經(jīng)生長因子（hNGF）的轉(zhuǎn)基因豬，并采集該轉(zhuǎn)基因豬分泌的唾液，分離純化hNGF用于人類神經(jīng)性疾病的治療?；卮鹣铝袉栴}：
（1）步驟一：將hNGF基因序列替換位于載體XhoⅠ和NotⅠ酶切位點之間的序列，構(gòu)建含人源NGF的基因表達載體。該步驟中選擇XhoⅠ和NotⅠ兩種限制酶的優(yōu)點是 避免切制后目的基因和質(zhì)粒發(fā)生自身環(huán)化，且能保證正確連接避免切制后目的基因和質(zhì)粒發(fā)生自身環(huán)化，且能保證正確連接，在hNGF基因的兩端也必須含有XhoⅠ和NotⅠ酶識別的序列，添加的方法是 在對hNGF基因進行PCR擴增時，將兩種限制酶的識別序列合成在兩種引物中在對hNGF基因進行PCR擴增時，將兩種限制酶的識別序列合成在兩種引物中。
（2）步驟二：將基因表達載體導入豬胎兒成纖維細胞。該步驟使用的方法是 顯微注射法顯微注射法，目的是 使hNGF基因進入受體細胞，并在受體細胞中維持穩(wěn)定和表達使hNGF基因進入受體細胞，并在受體細胞中維持穩(wěn)定和表達。
（3）步驟三：重構(gòu)胚的構(gòu)建。篩選成功導入重組質(zhì)粒的豬胎兒成纖維細胞，進行細胞培養(yǎng)，該過程中會出現(xiàn) 細胞貼壁和接觸抑制細胞貼壁和接觸抑制的現(xiàn)象，需要用胰蛋白酶進行處理并及時分瓶培養(yǎng)。獲得的細胞作為核供體注入 去核的豬卵母細胞去核的豬卵母細胞中。
（4）步驟四：轉(zhuǎn)基因克隆豬的獲得。重構(gòu)胚發(fā)育到 桑葚胚或囊胚桑葚胚或囊胚后經(jīng)胚胎移植導入代孕豬子宮內(nèi)，獲得的轉(zhuǎn)基因豬的遺傳物質(zhì)來自 豬成纖維細胞的細胞核、去核卵母細胞的細胞質(zhì)和人的hNGF基因豬成纖維細胞的細胞核、去核卵母細胞的細胞質(zhì)和人的hNGF基因。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】避免切制后目的基因和質(zhì)粒發(fā)生自身環(huán)化，且能保證正確連接；在對hNGF基因進行PCR擴增時，將兩種限制酶的識別序列合成在兩種引物中；顯微注射法；使hNGF基因進入受體細胞，并在受體細胞中維持穩(wěn)定和表達；細胞貼壁和接觸抑制；去核的豬卵母細胞；桑葚胚或囊胚；豬成纖維細胞的細胞核、去核卵母細胞的細胞質(zhì)和人的hNGF基因
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/18 3:0:1組卷：3引用：1難度：0.7
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1．紅細胞生成素（EPO）是人體內(nèi)促進紅細胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然 EPO來源極為有限，某科研團隊采用基因工程培育轉(zhuǎn)基因羊作為乳腺生物反應器，使其能合成EPO。下列有關敘述錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應用的生物技術有（答出2項）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
（4）⑤過程需要用到等植物激素，在誘導愈傷組織分化成幼苗的過程中，這兩種植物激素的比例會發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
3．如表為5種限制酶的識別序列及切割位點，如圖為某種質(zhì)粒和目的基因，箭頭所指為限制酶酶切位點?，F(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中，以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說法正確的是（ ）
限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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