新型冠狀病毒是一種帶包膜的RNA病毒，膜表面的刺突蛋白（S蛋白）與宿主細(xì)胞膜表面受體ACE2結(jié)合，介導(dǎo)病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，RBD是S蛋白中負(fù)責(zé)和受體ACE2結(jié)合的關(guān)鍵蛋白?；谝陨涎芯磕晨蒲袌F(tuán)隊(duì)研發(fā)了一種重組新冠病毒疫苗（也叫重組亞單位疫苗），制備過程如下，回答下列問題。

（1）該疫苗的制備過程中，涉及的現(xiàn)代生物技術(shù)有

基因工程、動物細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白質(zhì)的分離提純

基因工程、動物細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白質(zhì)的分離提純

。（答出兩個即可）
（2）逆轉(zhuǎn)錄獲得的RBD蛋白基因不含有限制酶識別序列，這就需要在對目的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，在設(shè)計(jì)的目的基因引物的一端加裝限制酶的識別序列，應(yīng)加在引物的

5'

5'

端（填“3'”或“5'”），為了避免目的基因自身環(huán)化，最好在兩種引物的一端加裝

不同

不同

（填“相同”或“不同”）限制酶的識別序列。
（3）使RBD蛋白基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要借助載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，原因是

目的基因無復(fù)制原點(diǎn)、無表達(dá)所需啟動子等，直接導(dǎo)入受體細(xì)胞不能表達(dá)

目的基因無復(fù)制原點(diǎn)、無表達(dá)所需啟動子等，直接導(dǎo)入受體細(xì)胞不能表達(dá)

（答出兩點(diǎn)即可）。
（4）體外培養(yǎng)CHO細(xì)胞時，需要提供無菌、無毒的環(huán)境，即對

培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具

培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具

進(jìn)行無菌處理。培養(yǎng)過程中還要定期更換培養(yǎng)液，其目的是

清除代謝產(chǎn)物，防止對細(xì)胞造成危害

清除代謝產(chǎn)物，防止對細(xì)胞造成危害

。
（5）為了確定目的基因是否表達(dá)，應(yīng)從受體細(xì)胞中提取

RBD蛋白

RBD蛋白

（填“RBD蛋白”或“所有蛋白質(zhì)”）來檢測。