抗除草劑轉(zhuǎn)基因作物的推廣可有效減輕除草勞動(dòng)強(qiáng)度、提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)效率。圖1為抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米的技術(shù)流程。
（1）構(gòu)建含除草劑抗性基因的表達(dá)載體，傳統(tǒng)的方法是目的基因通過 限制酶、DNA連接限制酶、DNA連接酶與載體進(jìn)行重組。另外，可通過 PCRPCR技術(shù)在目的基因兩側(cè)添加相應(yīng)限制酶識(shí)別序列，以便構(gòu)建表達(dá)載體。
（2）科研人員研發(fā)了新的DNA重組方法——無縫克隆In-Fusion技術(shù)，如圖2所示。In-Fusion酶能夠識(shí)別任何具有相同15bp末端序列的線性DNA分子并使其形成黏性末端，據(jù)此實(shí)現(xiàn)目的基因和載體的連接。和傳統(tǒng)方法比，無縫克隆In-Fusion技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是 插入位點(diǎn)不受限制酶識(shí)別序列限制，實(shí)現(xiàn)了目的基因在載體任意位點(diǎn)上的插入插入位點(diǎn)不受限制酶識(shí)別序列限制，實(shí)現(xiàn)了目的基因在載體任意位點(diǎn)上的插入。
①應(yīng)用以上方法構(gòu)建含有A基因和GUS基因的重組DNA分子時(shí)，首先獲得了圖3中的3種DNA分子，然后混合進(jìn)行In-Fusion反應(yīng)。
如果引物2上額外添加的片段與GUS基因e片段（圖中加粗表示）序列相同，那么引物1和引物4上額外增加的片段分別與載體中的片段（圖中加粗表示） a（d）a（d）、d（a）d（a）相同。完成重組反應(yīng)后，將表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。
②為篩選成功轉(zhuǎn)入目標(biāo)重組DNA分子的菌落，可以選取引物 1、41、4擴(kuò)增目的基因并電泳檢測。
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織時(shí)，常用含除草劑的選擇培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織。由于愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，導(dǎo)致未成功轉(zhuǎn)化的愈傷組織也可能在選擇培養(yǎng)基上生長。針對(duì)上述現(xiàn)象，可以在選擇培養(yǎng)基中同時(shí)加入 無色物質(zhì)K無色物質(zhì)K進(jìn)行篩選，其中周圍的培養(yǎng)基 顯顯（填“顯”或“不顯”）藍(lán)色的愈傷組織是轉(zhuǎn)化成功的，原因是 轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織中，GUS基因正確表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物能催化培養(yǎng)基中的無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色；農(nóng)桿菌中的GUS由于含有內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄序列不能切除，不能正確表達(dá)，不能催化培養(yǎng)基中的無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織中，GUS基因正確表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物能催化培養(yǎng)基中的無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色；農(nóng)桿菌中的GUS由于含有內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄序列不能切除，不能正確表達(dá)，不能催化培養(yǎng)基中的無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制酶、DNA連接；PCR；插入位點(diǎn)不受限制酶識(shí)別序列限制，實(shí)現(xiàn)了目的基因在載體任意位點(diǎn)上的插入；a（d）；d（a）；1、4；無色物質(zhì)K；顯；轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織中，GUS基因正確表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物能催化培養(yǎng)基中的無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色；農(nóng)桿菌中的GUS由于含有內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄序列不能切除，不能正確表達(dá)，不能催化培養(yǎng)基中的無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/29 8:0:10組卷：31引用：4難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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