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菁優(yōu)網(wǎng)PHB2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白?；卮鹣铝袉栴}：
（1）為獲取phb2基因，提取該動物肝臟組織的
總RNA
總RNA
，再經(jīng)
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
過程得到cDNA，將其作為PCR反應(yīng)的模板，并設(shè)計一對特異性引物來擴(kuò)增目的基因。與生物體內(nèi)的DNA聚合酶相比，PCR技術(shù)中所用的DNA聚合酶特點是
耐高溫
耐高溫
。
（2）圖1為所用載體圖譜示意圖，質(zhì)粒DNA含有啟動子，啟動子是
RNA聚合酶
RNA聚合酶
識別并結(jié)合的位點。質(zhì)粒DNA分子上有復(fù)制原點，可以保證質(zhì)粒在受體細(xì)胞中能
準(zhǔn)確進(jìn)行復(fù)制
準(zhǔn)確進(jìn)行復(fù)制
。
名稱 識別序列及切割位點 名稱 識別序列及切割位點
HindⅢ A↓AGCTT EcoRⅠ G↓AATTC
PvitⅡ CAG↓CTG PstⅠ CTGC↓AG
KpnⅠ G↓GTACC BamHⅠ G↓GATCC
注：箭頭表示切割位點
（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體需要用到限制酶和DNA連接酶，其中，DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間形成的化學(xué)鍵是
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
。圖1中限制酶的識別序列及切割位點見圖2，為使phb2基因（該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列）與載體正確連接，在擴(kuò)增的phb2基因兩端分別引入
EcoRⅠ
EcoRⅠ
和
PvitⅡ
PvitⅡ
兩種不同限制酶的識別序列。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進(jìn)行連接時，可選用
T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
（填“E?coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。
（4）轉(zhuǎn)化前需用
Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于
感受態(tài)
感受態(tài)
，以提高轉(zhuǎn)化效率。將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

【答案】總RNA；逆轉(zhuǎn)錄；耐高溫；RNA聚合酶；準(zhǔn)確進(jìn)行復(fù)制；磷酸二酯鍵；EcoRⅠ；PvitⅡ；T4DNA連接酶；Ca2+；感受態(tài)；氨芐青霉素
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/9/5 5:0:8組卷：16引用：2難度：0.6
相似題

  • 1．目前，科學(xué)家已在牛和山羊等動物乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了抗凝血酶、血清白蛋白等多種蛋白類藥物．下列與之相關(guān)的說法，正確的是（　　）

    發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：5引用：1難度：0.9

  • 2．最近，科學(xué)家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長激素并將其分泌到尿液中．這是繼哺乳動物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后，在膀胱生物反應(yīng)器研究上另一進(jìn)展．
    （1）將人的生長激素基因?qū)胄∈笫荏w細(xì)胞，常用的方法是
     
    ．所使用到儀器是
     
    ．
    （2）在基因工程中，將目的基因與運載體結(jié)合時，必須用
     
    酶和
     
    酶．常用的運載體有
     
    、
     
    、
     
    等，而作為運載體必須具備相應(yīng)的條件，例如應(yīng)具有
     
    以便進(jìn)行篩選．進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入動物的
     
    中，原因是
     
    ．
    （3）通常采用
     
    技術(shù)檢測外源基因是否插入了小鼠的基因組中．
    （4）在研究膀胱生物反應(yīng)器時，應(yīng)使外源基因在小鼠的
     
    細(xì)胞中特異性表達(dá)．
    （5）如果將藥物蛋白基因轉(zhuǎn)入動物如牛、羊的膀胱上皮細(xì)胞中，從轉(zhuǎn)基因牛、羊尿液中提取藥物比從乳汁中提取藥物的更大優(yōu)越性在于
     
    ．

    發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：3引用：1難度：0.3

  • 3．抗凝血酶是一種天然抗凝血劑，在臨床上被廣泛應(yīng)用。目前科學(xué)家已在豬和羊等動物的乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了人的抗凝血酶，如圖是構(gòu)建抗凝血酶基因表達(dá)載體所用的pBR質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)及人抗凝血酶基因所在的DNA片段，回答下列問題：
    菁優(yōu)網(wǎng)
    （1）現(xiàn)有以下4種引物，引物A15'-GGACCCCGGG-3'；引物B：5'-CATTTCTAGA-3'；引物C：5'-CCTGGGGCCC-3'；引物D：5'-GTAAAGATCT-3'；，利用PCR擴(kuò)增獲取抗凝血酶基因，應(yīng)選用引物
     
    （填引物名稱），擴(kuò)增產(chǎn)物可選擇限制酶
     
    切割后再利用E?coliDNA連接酶連接到pBR質(zhì)粒上。
    （2）所選用的pBR質(zhì)粒上含有啟動子，其作用是
     
    ，將構(gòu)建的基因表達(dá)載體先導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞，然后將大腸桿菌涂布到含新霉素的選擇培養(yǎng)基上，長出了多個大腸桿菌菌落，這些菌落并非都是目的菌株，原因是
     
    。
    （3）將篩選得到的目的菌株提取質(zhì)粒，再通過
     
    方法導(dǎo)入到豬或羊的
     
    細(xì)胞內(nèi)，通過培養(yǎng)即可獲得能表達(dá)人抗凝血酶的乳腺生物反應(yīng)器。

    發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：4引用：1難度：0.6
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