融合PCR技術是采用具有互補末端的引物，將不同來源的擴增片段連接起來的方法，其過程如圖1．圖2是中間載體1和中間載體2（利用融合PCR技術構建成）構建成葉綠體定點整合表達載體示意圖（限制酶酶切位點標注于載體外側），葉綠體定點整合表達載體通過與葉綠體基因的同源重組，將目的基因整合于葉綠體 DNA的特定位點上。請回答下列問題：
（1）圖1中，在第一階段獲得兩種DNA的過程中，一般須將引物1、2和引物3、4置于不同反應系統(tǒng)中。這是因為 引物2和3中存在互補配對片段，置于同一反應系統(tǒng)時它們會發(fā)生結合而失去作用引物2和3中存在互補配對片段，置于同一反應系統(tǒng)時它們會發(fā)生結合而失去作用。加入到PCR反應體系的物質，除圖中所示引物、模板DNA外，還應包括Mg2+、擴增緩沖液和 Taq酶和4種脫氧核苷酸（dCTP、dATP、dGTP、dTTP）Taq酶和4種脫氧核苷酸（dCTP、dATP、dGTP、dTTP）。
（2）圖1中，在引物1、引物2組成的反應系統(tǒng)中，經第一階段要形成圖示雙鏈DNA，至少要經過 22次復制。引物1、引物2組成的反應系統(tǒng)和引物3、引物4組成的反應系統(tǒng)中均進行一次復制，共產生 44種雙鏈DNA分子。
（3）圖2中，構建成定點整合表達載體需用到的工具酶有 SpeⅠ、SalⅠ和DNA連接酶SpeⅠ、SalⅠ和DNA連接酶，圖中定點整合表達載體上未標出的結構是 復制原點復制原點。
（4）利用定點整合表達載體將目的基因導入植物細胞的葉綠體中的優(yōu)點是 能實現(xiàn)定點整合到葉綠體中，且不易隨花粉擴散帶來安全問題能實現(xiàn)定點整合到葉綠體中，且不易隨花粉擴散帶來安全問題。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】引物2和3中存在互補配對片段，置于同一反應系統(tǒng)時它們會發(fā)生結合而失去作用；Taq酶和4種脫氧核苷酸（dCTP、dATP、dGTP、dTTP）；2；4；SpeⅠ、SalⅠ和DNA連接酶；復制原點；能實現(xiàn)定點整合到葉綠體中，且不易隨花粉擴散帶來安全問題
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：22引用：2難度：0.7
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1．數(shù)字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經過次復制。第一次PCR的產物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質粒進行連接后，需先用處理農桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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