營養(yǎng)缺陷型菌株是指野生型菌株經過人工誘變或自然突變失去合成某種營養(yǎng)的能力,只有在基本培養(yǎng)基中補充所缺乏的營養(yǎng)因子后才能生長的菌株,包括氨基酸缺陷型菌株、維生素缺陷型菌株和堿基缺陷型菌株等。篩選營養(yǎng)缺陷型菌株的常規(guī)步驟為:誘變育種→淘汰野生型→檢出缺陷型→鑒定缺陷型。
(1)用紫外線誘變大腸桿菌,誘變后常采用含青霉素的培養(yǎng)基淘汰野生型大腸桿菌,使營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌得以富集。培養(yǎng)大腸桿菌時,需將培養(yǎng)基的pH調至 中性或微堿中性或微堿性,再在壓力和溫度分別為 100kPa,121℃100kPa,121℃的條件下進行高壓蒸汽滅菌,富集培養(yǎng)時一般使用液體培養(yǎng)基并在搖床上進行,搖床的作用是 增加培養(yǎng)液的溶解氧,使菌種和培養(yǎng)液充分混合增加培養(yǎng)液的溶解氧,使菌種和培養(yǎng)液充分混合。
(2)夾層平板培養(yǎng)法可用于營養(yǎng)缺陷型菌株的檢出,其原理如圖1所示,先在培養(yǎng)皿上倒一薄層基本培養(yǎng)基,凝固后再接種一層誘變處理的菌液,其上再澆一層基本培養(yǎng)基,凝固后放入 恒溫培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)出菌落,再倒一層完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。若結果如圖2所示,其中菌落 BB(填“A”或“B”)即為檢出的營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌菌株。
(3)研究小組一利用生長圖譜法初步確定檢出的營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌的類型,即在基本培養(yǎng)基乙的A~E這5個區(qū)域中分別添加不同的營養(yǎng)物質,然后用 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法將檢出的營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌接種在圖3培養(yǎng)基上,若培養(yǎng)一段時間后在圖3的BC交界處長出了菌落,則說明該菌株是 氨基酸和維生素氨基酸和維生素營養(yǎng)缺陷型菌。
(4)研究小組二用上述方法鑒定了某菌株屬于維生素營養(yǎng)缺陷型,為了進一步確定該菌株的具體類型,他們把15種維生素按照不同組合分為5個小組,用5個濾紙片分別蘸取不同小組的維生素,然后覆于接種后的瓊脂平板上培養(yǎng)一段時間。
組別 | 維生素組合 | ||||
1 | 維生素A | 維生素B1 | 維生素B2 | 維生素B6 | 維生素B12 |
2 | 維生素C | 維生素B1 | 維生素D2 | 維生素E | 煙酰胺 |
3 | 葉酸 | 維生素B2 | 維生素D2 | 膽堿 | 泛酸鈣 |
4 | 對氨基苯甲酸 | 維生素B6 | 維生素E | 膽堿 | 肌醇 |
5 | 生物素 | 維生素12 | 煙酰胺 | 泛酸鈣 | 肌醇 |
維生素B1
維生素B1
;若菌株為葉酸和生物素的雙營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌,則其在圖4培養(yǎng)基上形成菌落的位置是 3與5的交界處
3與5的交界處
。【答案】中性或微堿;100kPa,121℃;增加培養(yǎng)液的溶解氧,使菌種和培養(yǎng)液充分混合;恒溫培養(yǎng)箱;B;稀釋涂布平板;氨基酸和維生素;維生素B1;3與5的交界處
【解答】
【點評】
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