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大腸桿菌pUC18質(zhì)粒是基因工程中常用的運載體。某限制酶在此質(zhì)粒上的唯一酶切位點位于LacZ基因中,如果沒有插入外源基因,LacZ基因便可表達(dá)出口一半乳糖苷酶。當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和X-gal時,X-gal便會被β一半乳糖苷酶水解成藍(lán)色,大腸桿菌將形成藍(lán)色菌落。反之,則形成白色菌落。下圖表示利用此質(zhì)粒實施基因工程的主要流程。
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請分析并回答:
(1)已獲得的目的基因可利用
PCR
PCR
技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。
(2)目的基因插入質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程中,需要DNA連接酶恢復(fù)
磷酸二酯
磷酸二酯
鍵。
(3)將試管I中的物質(zhì)和大腸桿菌共同置于試管Ⅱ的目的是
進(jìn)行轉(zhuǎn)化
進(jìn)行轉(zhuǎn)化
;大腸桿菌需事先用Ca2+進(jìn)行處理,目的是
使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài)
使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài)
。
(4)將試管Ⅱ中的菌液接種于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng),培養(yǎng)基中應(yīng)含有大腸桿菌必需的營養(yǎng)物質(zhì)包括
碳源、氮源、無機鹽、水
碳源、氮源、無機鹽、水
和生長因子,還應(yīng)加入IPTG、X-gal以及氨芐青霉素,其中加入氨芐青霉素的作用是篩選出
導(dǎo)入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌
導(dǎo)入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌
。
(5)若觀察到培養(yǎng)基上出現(xiàn)
色菌落,則說明大腸桿菌中已成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。如果作為受體細(xì)胞的大腸桿菌也含有LacZ基因,則不利于重組質(zhì)粒的篩選,原因是
無論大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒,均會呈現(xiàn)藍(lán)色菌落
無論大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒,均會呈現(xiàn)藍(lán)色菌落
。

【答案】PCR;磷酸二酯;進(jìn)行轉(zhuǎn)化;使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài);碳源、氮源、無機鹽、水;導(dǎo)入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌;白;無論大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒,均會呈現(xiàn)藍(lán)色菌落
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:77引用:11難度:0.5
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  • 1.下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:6引用:1難度:0.7
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    (1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲得?;蛭膸彀?
     
     

    (2)生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時,解開DNA雙鏈的酶是
     
    。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時,使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是
     
    。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的
     
    。
    (3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有
     
     
    ,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是
     
    。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時,DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是
     
    。
    (4)提取RNA時,提取液中需添加RNA酶抑制劑,其目的是
     
    。
    (5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提高,根據(jù)中心法則分析,其可能的原因是
     
    。

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:2引用:2難度:0.6
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