1．口服腫瘤疫苗可以借由腸道豐富的免疫環(huán)境來(lái)刺激強(qiáng)烈的抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而達(dá)到良好的免疫效果。研究人員對(duì)大腸桿菌（腸道中最豐富的共生菌）進(jìn)行基因工程改造獲得工程菌。該工程菌可作為口服腫瘤疫苗激活機(jī)體特異性免疫，實(shí)現(xiàn)腫瘤的預(yù)防和治療。具體研究如下：
（1）疫苗載體構(gòu)建及工程菌的制備
部分腸道細(xì)菌能夠分泌外膜囊泡（OMV），OMV能穿越腸道上皮屏障，活化腸黏膜內(nèi)豐富的免疫細(xì)胞。研究人員利用如圖1所示元件構(gòu)建表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌來(lái)制備工程菌：

（注：ClyA：OMV表面特異蛋白的基因；Ag：腫瘤細(xì)胞表面特異性抗原基因；mFc：小鼠Fc基因）
①選擇大腸桿菌來(lái)制備工程菌的原因有 （答出兩點(diǎn)即可）。
②圖1中，ClyA基因的作用是 ；mFc基因的表達(dá)產(chǎn)物能夠與樹(shù)突狀細(xì)胞（DCs）表面的特異性受體結(jié)合，從而提高DCs OMV的能力。
（2）免疫效果調(diào)節(jié)及評(píng)估
為避免長(zhǎng)期抗原刺激引起的免疫耐受，研究人員引入阿拉伯糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子來(lái)控制ClyA-Ag-mFc融合蛋白基因的表達(dá)，即只有在阿拉伯糖存在的情況下，才會(huì)誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白。為進(jìn)一步證實(shí)按上述流程操作制備的工程菌在人為可控條件下引發(fā)特異性免疫反應(yīng)的效果，研究人員用健康的小鼠進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：

組別	載體構(gòu)建具體操作	第0、4、8天口服阿拉伯糖	結(jié)果檢測(cè)
A組	空載體	+	第12天，每組隨機(jī)取5只小鼠的等量的脾臟細(xì)胞與肺轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，檢測(cè)黑色素瘤細(xì)胞存活率，結(jié)果如圖2。
B組	ClyA-mFc	+
c組	ClyA-OVA	+
D組	ClyA-OVA-mFc	（a）
E組	（b）	（c）

（注：“+”代表口服、“-”代表不口服；OVA：肺轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞表面特異性抗原基因）
①D、E組的操作和口服情況分別是a：；b：；c 。圖2結(jié)果說(shuō)明工程菌在人為可控條件下引發(fā)了特異性免疫反應(yīng)，理由是 。
②研究人員在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，增加了實(shí)驗(yàn)小組口服阿拉伯糖的頻率和天數(shù)，其目的是研究 。
（3）該工程菌的開(kāi)發(fā)為不同腫瘤的精準(zhǔn)治療提供了可能。參考本實(shí)驗(yàn)，利用圖3設(shè)計(jì)針對(duì)治療皮下結(jié)腸腫瘤的工程菌表達(dá)載體元件 。

2．猴痘是由猴痘病毒（一種RNA病毒）感染所致的一種病毒性人畜共患病，臨床上表現(xiàn)為發(fā)熱、皮疹、淋巴結(jié)腫大等。據(jù)世衛(wèi)組織回顧性研究數(shù)據(jù)顯示，天花疫苗接種對(duì)預(yù)防猴痘有效性可達(dá)85%。中國(guó)首席科學(xué)家、中國(guó)生物董事長(zhǎng)楊曉明團(tuán)隊(duì)去年宣布成功研發(fā)了針對(duì)猴痘的候選mRNA疫苗VGPox1-3。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。
（1）天花疫苗接種對(duì)預(yù)防猴痘有效性達(dá)85%的直接原因是 。
（2）圖甲為mRNA疫苗VGPox 1-3模式圖，接種疫苗后，RNA外面包裹脂質(zhì)外膜的作用是 。
（3）圖乙所示為利用基因工程生產(chǎn)mRNA疫苗VGPox 1-3的過(guò)程，其中①、②所需酶分別是  、。③過(guò)程一般需要用 處理大腸桿菌使細(xì)胞處于 的生理狀態(tài)，以完成轉(zhuǎn)化過(guò)程。
（4）研究人員給招募的志愿者接種該疫苗后，通常使用 技術(shù)檢測(cè)志愿者體內(nèi)是否產(chǎn)生相應(yīng)抗體。

3．閱讀以下材料，回答（1）～（5）。
基因魔剪：CRISPR/Cas系統(tǒng)       要揭示生命的運(yùn)作原理，常需要對(duì)基因進(jìn)行編輯。在過(guò)去，這一步異常艱難。但隨著CRISPR/Cas技術(shù)的出現(xiàn)，科學(xué)家已能在極短時(shí)間內(nèi)就更改生命密碼。
       CRISPR/Cas9系統(tǒng)由Cas9蛋白和人工設(shè)計(jì)的gRNA構(gòu)成。在gRNA引導(dǎo)下，Cas9與靶序列結(jié)合并將DNA雙鏈切斷。隨后細(xì)胞通過(guò)自身的DNA損傷修復(fù)機(jī)制，將斷裂上下游兩端的序列連接起來(lái)，但通常會(huì)在斷裂處造成少量核苷酸的插入或缺失。當(dāng)DNA雙鏈斷裂后，如果細(xì)胞中有DNA修復(fù)模板（由需要插入的目的基因和靶序列上下游的同源序列組成），斷裂部分可依據(jù)修復(fù)模板進(jìn)行精確修復(fù)，從而將目的基因插入到指定位點(diǎn)。
       通過(guò)在Cas9基因中引入突變，獲得了只有切割一條鏈活性的nCas9。將nCas9與胞嘧啶脫氨酶或腺嘌呤脫氨酶融合，科學(xué)家開(kāi)發(fā)出了單堿基編輯技術(shù)（圖2），能夠?qū)Π形稽c(diǎn)進(jìn)行精準(zhǔn)的堿基編輯，最終可以分別實(shí)現(xiàn)C→T（G→A）或A→G（T→C）的堿基替換。

       對(duì)CRISPR/Cas系統(tǒng)的不斷改造，使其在基因編輯外，還可用于激活或抑制基因的轉(zhuǎn)錄等。雖然目前CRISPR/Cas技術(shù)還存在一些不足，如脫靶問(wèn)題等，但作為一種革命性的技術(shù)，其應(yīng)用前景廣闊。
（1）利用CRISPR/Cas9技術(shù)進(jìn)行基因編輯，需構(gòu)建含gRNA基因和Cas基因的，并導(dǎo)入受體細(xì)胞。gRNA依據(jù)原則與靶序列特異性結(jié)合，引導(dǎo)Cas9蛋白進(jìn)行切割。
（2）有些遺傳病是由于基因中一個(gè)堿基對(duì)的改變引起的，如果要修正此基因突變，圖示的三種途徑中，哪種更為合適？請(qǐng)判斷并說(shuō)明理由。
（3）如果要利用CRISPR/Cas9技術(shù)將一個(gè)基因從基因組序列中刪除，設(shè)計(jì)gRNA的思路是。
（4）將CRISPR/Cas9技術(shù)用于抑制基因轉(zhuǎn)錄時(shí)（不改變基因結(jié)構(gòu)），需對(duì)CRISPR/Cas9系統(tǒng)進(jìn)行改造和設(shè)計(jì)，請(qǐng)寫出基本思路。
（5）將CRISPR/Cas技術(shù)應(yīng)用于人類基因的編輯時(shí)，特別要注意方面的問(wèn)題。