凝乳酶是奶制品加工中經(jīng)常用到的一種酶,其傳統(tǒng)制備方法的產(chǎn)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)需要。科學(xué)家研究利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)凝乳酶,其部分環(huán)節(jié)如圖所示。請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題:
(1)從剛出生5天的小牛皺胃組織中提取總RNA,經(jīng) 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程獲得總cDNA。通過(guò)PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性擴(kuò)增出凝乳酶基因,原因是 引物是根據(jù)凝乳酶基因的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的(或引物能與凝乳酶基因的cDNA 特異性結(jié)合)引物是根據(jù)凝乳酶基因的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的(或引物能與凝乳酶基因的cDNA 特異性結(jié)合)。
(2)過(guò)程①所使用的工具酶有 限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶。凝乳酶基因和質(zhì)粒上均有NdeⅠ和XhoⅠ兩種酶的識(shí)別序列,分別是-C↓ATATG-,-C↓TCGAG-。用以上兩種酶分別切割目的基因和質(zhì)粒,得到的黏性末端分別為 -TATA和-AGCT--TATA和-AGCT-。
(3)大腸桿菌作為凝乳酶基因受體細(xì)胞的主要優(yōu)點(diǎn)有 繁殖快、易培養(yǎng)、產(chǎn)量高,且遺傳物質(zhì)相對(duì)較少繁殖快、易培養(yǎng)、產(chǎn)量高,且遺傳物質(zhì)相對(duì)較少(至少答出兩點(diǎn))。用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌,一般情況下,不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,原因是 未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱。
(4)篩選出成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌,經(jīng)多代培養(yǎng)后,仍能從大腸桿菌中提取出凝乳酶基因。據(jù)此判斷,你認(rèn)為凝乳酶基因是否已在大腸桿菌中成功轉(zhuǎn)化?請(qǐng)說(shuō)明你的觀點(diǎn)及理由:不能。理由是大腸桿菌中檢測(cè)到凝乳酶基因,說(shuō)明目的基因已經(jīng)成功導(dǎo)入大腸桿菌中,但不能說(shuō)明凝乳酶基因已經(jīng)成功轉(zhuǎn)化不能。理由是大腸桿菌中檢測(cè)到凝乳酶基因,說(shuō)明目的基因已經(jīng)成功導(dǎo)入大腸桿菌中,但不能說(shuō)明凝乳酶基因已經(jīng)成功轉(zhuǎn)化。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄;引物是根據(jù)凝乳酶基因的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的(或引物能與凝乳酶基因的cDNA 特異性結(jié)合);限制酶和DNA連接酶;-TATA和-AGCT-;繁殖快、易培養(yǎng)、產(chǎn)量高,且遺傳物質(zhì)相對(duì)較少;未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱;不能。理由是大腸桿菌中檢測(cè)到凝乳酶基因,說(shuō)明目的基因已經(jīng)成功導(dǎo)入大腸桿菌中,但不能說(shuō)明凝乳酶基因已經(jīng)成功轉(zhuǎn)化
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:6引用:1難度:0.7
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發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6 -
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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