大芻草是玉米是原始祖先，具有較強的抗病抗逆特性，為玉米育種提供了原始的遺傳材料。研究發(fā)現(xiàn)大芻草基因組中有一個D基因僅在體細(xì)胞（2n）和精子中正常表達(dá)，在卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究D基因表達(dá)對卵細(xì)胞的影響，設(shè)計了如圖1實驗。據(jù)圖回答：
（1）D基因在大芻草卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄，從基因結(jié)構(gòu)角度推測其可能的原因是卵細(xì)胞中

D基因的啟動子無法啟動轉(zhuǎn)錄

D基因的啟動子無法啟動轉(zhuǎn)錄

。
（2）要構(gòu)建大芻草的CDNA文庫，應(yīng)從大芻草

體細(xì)胞或精子

體細(xì)胞或精子

中提取總RNA，原因是

D基因僅在大芻草的體細(xì)胞和精子中正常表達(dá)

D基因僅在大芻草的體細(xì)胞和精子中正常表達(dá)

。由總RNA在相關(guān)酶的作用下獲得D基因編碼蛋白的序列。按如圖所示構(gòu)建重組表達(dá)載體。
（3）在過程①、②轉(zhuǎn)化篩選時，過程

②

②

中T-DNA整合到受體細(xì)胞染色體DNA上。
（4）從轉(zhuǎn)基因植株未成熟種子中分離出胚，觀察到細(xì)胞內(nèi)僅含一個染色體組，判定該胚是由未受精的卵細(xì)胞發(fā)育形成的，而一般情況下大芻草卵細(xì)胞在未受精時不進(jìn)行發(fā)育，由此表明

D基因表達(dá)能使卵細(xì)胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚

D基因表達(dá)能使卵細(xì)胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚

。
（5）在大芻草基因組中發(fā)現(xiàn)另一個B基因與其育性相關(guān)，為進(jìn)一步研究B基因的功能，研究者將一段T-DNA插入到B基因中，致使該基因失活，失活后的基因記為b,現(xiàn)以野生植株和突變植株作為親本進(jìn)行雜交實驗，統(tǒng)計母本植株的結(jié)實率，結(jié)果如表所示：

雜交編號	親本組合	結(jié)實率
a	♀BB×♂bb	0.1
b	♀bb×♂BB	0.5
c	♀BB×♂BB	0.5

①表中數(shù)據(jù)表明B基因失活后使

雄

雄

配子育性降低。
②讓雜交a的F₁給雜交b的F₁授粉，得到F₂。為驗證F₂植株的基因型，研究者據(jù)B基因、T-DNA的序列設(shè)計了3種引物，如圖2所示。隨機選取F₂植株若干，提取各植株的總DNA，分別用“引物Ⅰ+Ⅲ”組合及“Ⅱ+Ⅲ”組合進(jìn)行PCR，檢測是否能擴增（完整的T-DNA過大，不能完成PCR擴增），如果引物“Ⅰ+Ⅲ”組及“Ⅱ+Ⅲ”組進(jìn)行PCR均可完成擴增，則相應(yīng)植株的基因型為

Bb

Bb

。如果

僅引物“Ⅱ+Ⅲ”組進(jìn)行PCR能完成擴增，而“Ⅰ+Ⅲ”組不能完成擴增

僅引物“Ⅱ+Ⅲ”組進(jìn)行PCR能完成擴增，而“Ⅰ+Ⅲ”組不能完成擴增

，則相應(yīng)植株的基因型為BB。