為評(píng)估外源基因Vgb在菊花中的穩(wěn)定性以及對(duì)生態(tài)環(huán)境的影響，研究人員在種植轉(zhuǎn)基因菊花的第二年，隨機(jī)選取轉(zhuǎn)基因菊花株系及周邊非轉(zhuǎn)基因菊花和各種雜草，提取DNA。根據(jù)Vgb設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，電泳結(jié)果如圖。回答下列問(wèn)題：

（1）將外源基因Vgb整合到菊花細(xì)胞需要先構(gòu)建基因表達(dá)載體，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要使用的酶有

限制酶和DNA連接酶

限制酶和DNA連接酶

。重組載體進(jìn)入菊花細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱為

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化

。構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，外源基因Vgb插在啟動(dòng)子的上游，則在菊花細(xì)胞中檢測(cè)不到表達(dá)產(chǎn)物，主要原因是

目的基因無(wú)法轉(zhuǎn)錄

目的基因無(wú)法轉(zhuǎn)錄

。
（2）設(shè)計(jì)引物是PCR技術(shù)的關(guān)鍵步驟之一、根據(jù)Vgb設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，某同學(xué)設(shè)計(jì)的一組引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）為，此引物設(shè)計(jì)

不合理

不合理

（填“合理”或“不合理”），說(shuō)明理由：

引物Ⅰ和引物Ⅱ會(huì)因局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效

引物Ⅰ和引物Ⅱ會(huì)因局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效

。
（3）設(shè)置空白對(duì)照的目的是

排除實(shí)驗(yàn)操作、試劑污染等對(duì)結(jié)果的影響

排除實(shí)驗(yàn)操作、試劑污染等對(duì)結(jié)果的影響

。對(duì)于外源基因Vgb在菊花中的穩(wěn)定性以及對(duì)周邊植物的影響方面，圖中實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明

2年內(nèi)Vgb基因在菊花細(xì)胞中穩(wěn)定存在，且未發(fā)生向周邊植物的擴(kuò)散

2年內(nèi)Vgb基因在菊花細(xì)胞中穩(wěn)定存在，且未發(fā)生向周邊植物的擴(kuò)散

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