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單寧酶可水解單寧酸為沒食子酸，降低茶湯中單寧酸含量，解決茶飲料“冷后渾”問題和果汁類飲料除澀問題。我國科學(xué)家在土壤中篩選出分泌單寧酶的黑曲霉Lys117，利用基因工程對其進(jìn)行改造，提取單寧酶基因與強(qiáng)表達(dá)組件（強(qiáng)表達(dá)啟動子和信號肽）結(jié)合，最終實(shí)現(xiàn)單寧酶的高產(chǎn)。回答下列問題：
（1）黑曲霉Lys117的分離篩選：將土樣稀釋適量倍數(shù)后，采用涂布平板法接種于含有溴酚藍(lán)（溴酚藍(lán)在單寧酸環(huán)境中為藍(lán)紫色，在沒食子酸環(huán)境中為黃色）的選擇培養(yǎng)基上。該選擇培養(yǎng)基按物理性質(zhì)分屬于
固體
固體
培養(yǎng)基。根據(jù)選擇培養(yǎng)基的
黃色圈直徑的大小
黃色圈直徑的大小
（填現(xiàn)象）作為挑取單寧酶產(chǎn)生菌的標(biāo)志。
（2）單寧酶基因擴(kuò)增及組裝如圖所示：P1左側(cè)有RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn)，為實(shí)現(xiàn)單寧酶基因與強(qiáng)表達(dá)組件定向連接，PCR擴(kuò)增設(shè)計(jì)引物時(shí)需對引物添加相應(yīng)的限制酶識別序列。則PCR應(yīng)選擇的引物對為
P2與P3
P2與P3
，在各引物前添加的識別序列對應(yīng)的限制酶分別是
Bg1Ⅰ、EcoRⅠ
Bg1Ⅰ、EcoRⅠ
。
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（3）與強(qiáng)表達(dá)組件結(jié)合后的基因與Ti質(zhì)粒重組，該過程為基因工程的核心步驟，即
基因表達(dá)載體的構(gòu)建
基因表達(dá)載體的構(gòu)建
。利用農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒作為載體的原理是
農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上
農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上
，與目的基因?qū)胫参锛?xì)胞類似。已知信號肽負(fù)責(zé)把蛋白質(zhì)引導(dǎo)到不同的具膜細(xì)胞器內(nèi)，本實(shí)驗(yàn)中信號肽存在的意義為
信號肽會引導(dǎo)肽鏈轉(zhuǎn)移到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)繼續(xù)合成與加工
信號肽會引導(dǎo)肽鏈轉(zhuǎn)移到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)繼續(xù)合成與加工
。
（4）重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入目的菌并檢測：將重組Ti質(zhì)粒用特定方法導(dǎo)入黑霉菌Lys117，記為Lys117+，可依據(jù)
Lys117+中單寧酶表達(dá)量的高低
Lys117+中單寧酶表達(dá)量的高低
，最終鑒定出高產(chǎn)單寧酶的黑霉菌。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】固體；黃色圈直徑的大??；P2與P3；Bg1Ⅰ、EcoRⅠ；基因表達(dá)載體的構(gòu)建；農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上；信號肽會引導(dǎo)肽鏈轉(zhuǎn)移到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)繼續(xù)合成與加工；Lys117+中單寧酶表達(dá)量的高低
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：15引用：1難度：0.6
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  • 1．某種結(jié)腸癌細(xì)胞存在抑癌基因A的突變，研究人員準(zhǔn)備利用DNA重組技術(shù)將突變的抑癌基因A克隆到質(zhì)粒載體上，用于后續(xù)癌癥發(fā)生機(jī)制和癌癥治療的研究。下列說法正確的是（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/10/28 10:30:1組卷：5引用：2難度：0.7

  • 2．科學(xué)家對乳酸脫氫酶（LDH）進(jìn)行了改造，使其能夠高效地生產(chǎn)高純度的苯乳酸。回答下列有關(guān)問題：
    （1科學(xué)家改造乳酸脫氫酶時(shí)需要做的第一步是
     
    。研究發(fā)現(xiàn)，要將LDH基因改造成為mLDH（改造后的乳酸脫氫酶）基因，需將LDH第52位的酪氨酸替換為亮氨酸，使得活性中心增大，才能用于生產(chǎn)苯乳酸。
    ①先將LDH基因片段連人載體中，形成環(huán)狀質(zhì)粒（如圖1）。
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    將突變后的序列設(shè)計(jì)在引物1中，以環(huán)狀質(zhì)粒為PCR的
     
    ，再向體系中加入四種脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶、
     
    ，以及堿基替換了的引物擴(kuò)增LDH基因，PCR產(chǎn)物的序列便引入了預(yù)期的突變。
    ②上述PCR產(chǎn)物為鏈狀DNA分子，改造后的LDH基因序列位于PCR產(chǎn)物的兩側(cè)，需要用
     
    酶將產(chǎn)物兩端連接，獲得含有mLDH基因的質(zhì)粒。
    （2）產(chǎn)生苯乳酸的過程還需FDH酶參與?，F(xiàn)需要構(gòu)建同時(shí)含有mLDH、FDH的基因表達(dá)載體。請你根據(jù)圖2，提出將兩個基因依次連入載體的思路：
     
    （要體現(xiàn)選用的內(nèi)切酶和連接的先后順序）。
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    （3）上述科學(xué)實(shí)踐屬于生物工程中的
     
    工程。在生命科學(xué)高速發(fā)展的今天，基因改造已十分成熟，但有一些紅線不能觸碰，請你舉出一例我國明令禁止的生物工程應(yīng)用：
     
    。

    發(fā)布：2024/10/28 17:0:2組卷：9引用：2難度：0.6

  • 3．我國科學(xué)家將人類的生長激素（GH）基因?qū)膈庺~的受精卵，培育出能快速生長的轉(zhuǎn)基因鯉魚。下列敘述錯誤的是（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/10/28 17:0:2組卷：9引用：2難度：0.7
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