單寧酶可水解單寧酸為沒(méi)食子酸，降低茶湯中單寧酸含量，解決茶飲料“冷后渾”問(wèn)題和果汁類(lèi)飲料除澀問(wèn)題。我國(guó)科學(xué)家在土壤中篩選出分泌單寧酶的黑曲霉Lys117，利用基因工程對(duì)其進(jìn)行改造，提取單寧酶基因與強(qiáng)表達(dá)組件（強(qiáng)表達(dá)啟動(dòng)子和信號(hào)肽）結(jié)合，最終實(shí)現(xiàn)單寧酶的高產(chǎn)。回答下列問(wèn)題：
（1）黑曲霉Lys117的分離篩選：將土樣稀釋適量倍數(shù)后，采用涂布平板法接種于含有溴酚藍(lán)（溴酚藍(lán)在單寧酸環(huán)境中為藍(lán)紫色，在沒(méi)食子酸環(huán)境中為黃色）的選擇培養(yǎng)基上。該選擇培養(yǎng)基按物理性質(zhì)分屬于

固體

固體

培養(yǎng)基。根據(jù)選擇培養(yǎng)基的

黃色圈直徑的大小

黃色圈直徑的大小

（填現(xiàn)象）作為挑取單寧酶產(chǎn)生菌的標(biāo)志。
（2）單寧酶基因擴(kuò)增及組裝如圖所示：P1左側(cè)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，為實(shí)現(xiàn)單寧酶基因與強(qiáng)表達(dá)組件定向連接，PCR擴(kuò)增設(shè)計(jì)引物時(shí)需對(duì)引物添加相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列。則PCR應(yīng)選擇的引物對(duì)為

P2與P3

P2與P3

，在各引物前添加的識(shí)別序列對(duì)應(yīng)的限制酶分別是

Bg1Ⅰ、EcoRⅠ

Bg1Ⅰ、EcoRⅠ

。

（3）與強(qiáng)表達(dá)組件結(jié)合后的基因與Ti質(zhì)粒重組，該過(guò)程為基因工程的核心步驟，即

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

。利用農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒作為載體的原理是

農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上

農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上

，與目的基因?qū)胫参锛?xì)胞類(lèi)似。已知信號(hào)肽負(fù)責(zé)把蛋白質(zhì)引導(dǎo)到不同的具膜細(xì)胞器內(nèi)，本實(shí)驗(yàn)中信號(hào)肽存在的意義為

信號(hào)肽會(huì)引導(dǎo)肽鏈轉(zhuǎn)移到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)繼續(xù)合成與加工

信號(hào)肽會(huì)引導(dǎo)肽鏈轉(zhuǎn)移到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)繼續(xù)合成與加工

。
（4）重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入目的菌并檢測(cè)：將重組Ti質(zhì)粒用特定方法導(dǎo)入黑霉菌Lys117，記為L(zhǎng)ys117⁺，可依據(jù)

Lys117⁺中單寧酶表達(dá)量的高低

Lys117⁺中單寧酶表達(dá)量的高低

，最終鑒定出高產(chǎn)單寧酶的黑霉菌。