pBR322質(zhì)粒是基因工程中較常用的運(yùn)載體。如圖所示為pBR322質(zhì)粒，其中ampr（氨芐青霉素抗性基因）和tetr（四環(huán)素抗性基因）為標(biāo)記基因，ori為復(fù)制原點(diǎn)，其他均為限制酶及其識別位點(diǎn)，并且每種限制酶的識別位點(diǎn)都只有一個?；卮鹣铝袉栴}：
（1）制備重組質(zhì)粒，需要 限制限制酶和 DNA連接DNA連接酶。若制備重組質(zhì)粒時，使用PvuⅠ切割該質(zhì)粒，則檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，需要在培養(yǎng)基中添加 四環(huán)素四環(huán)素。
（2）該質(zhì)粒中的BamHⅠ識別的核苷酸序列及切割位點(diǎn)為-G↓GATCC-，而Sau3AⅠ識別的核苷酸序列只有4個堿基。若BamHⅠ和Sau3AⅠ分別切割DNA所形成的DNA片段能拼接成一條DNA鏈，則Sau3AⅠ識別的核苷酸序列及切割位點(diǎn)為 —↓GATC——↓GATC—。該拼接在一起的DNA片段，不一定能不一定能（填“能”“不能”或“不一定能”）被BamHⅠ識別。
（3）與圖示質(zhì)粒相比，完整的重組質(zhì)粒中還應(yīng)有 啟動子、終止子和目的基因啟動子、終止子和目的基因三種特殊的DNA片段。若受體細(xì)胞為大腸桿菌，則該菌經(jīng)鈣離子處理后，將具備的 容易吸收外界DNA容易吸收外界DNA特性。
（4）若要通過基因工程獲得轉(zhuǎn)基因萵苣，首先將構(gòu)建好的目的基因表達(dá)載體導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，目的是利用農(nóng)桿菌的 轉(zhuǎn)化作用轉(zhuǎn)化作用，使目的基因進(jìn)入萵苣細(xì)胞，并將其插入到萵苣細(xì)胞中的 染色體DNA染色體DNA上，使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)，形成轉(zhuǎn)基因萵苣。要想檢測獲得的轉(zhuǎn)基因萵苣中目的基因是否表達(dá)，在分子水平上可用 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交法進(jìn)行檢測，如果出現(xiàn)雜交帶，說明目的基因已經(jīng)表達(dá)蛋白質(zhì)產(chǎn)品，轉(zhuǎn)基因萵苣培育成功。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制；DNA連接；四環(huán)素；—↓GATC—；不一定能；啟動子、終止子和目的基因；容易吸收外界DNA；轉(zhuǎn)化作用；染色體DNA；抗原-抗體雜交
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/4 8:0:5組卷：1引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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