轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品已經(jīng)越來越多地進(jìn)入了人們的生活。2020年7月,兩種國產(chǎn)轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物獲得生物安全證書。這是近十年來第二批獲得生物安全證書的國產(chǎn)轉(zhuǎn)基因作物,一種是轉(zhuǎn)epsps和pat基因抗除草劑玉米(DBN9858),另一種是轉(zhuǎn)基因抗除草劑大豆。我國是農(nóng)業(yè)大國,對轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的管理非常嚴(yán)格。根據(jù)我國法規(guī),除需對國產(chǎn)轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物進(jìn)行檢測外,進(jìn)出境的所有農(nóng)產(chǎn)品均需進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分的檢測。
對轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品的檢測方法,目前主要有兩類:一類是以導(dǎo)入外源基因的特定DNA序列為檢測對象;另一類則是以外源基因表達(dá)的蛋白質(zhì)為檢測對象。通常被檢測的特定DNA序列包括兩類:一類是非目的基因序列,主要為載體上通常具有的各種組成元件;另一類被檢測的則是目的基因序列本身。
基因芯片技術(shù)是一種能有效地對轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)行檢測的新技術(shù)。以對DBN9858的檢測為例,第一步,針對待測的特定DNA片段設(shè)計(jì)引物,擴(kuò)增出的特定DNA片段帶上標(biāo)記制成探針,經(jīng)變性后通過芯片點(diǎn)樣儀固定到雜交膜上,再經(jīng)過一定的處理,便得到可用于檢測的DNA芯片(如圖1);第二步,從待測植物中提取DNA作為模板,加入引物進(jìn)行擴(kuò)增;第三步,將擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過變性處理后鋪于芯片表面,放入雜交盒中,在適宜條件下進(jìn)行雜交;第四步,待反應(yīng)結(jié)束后,對芯片進(jìn)行清洗等處理,用儀器檢測芯片上的雜交結(jié)果。利用基因芯片可以實(shí)現(xiàn)一次性高通量快速檢測,是一種具有良好發(fā)展前景的檢測手段。
(1)對DBN9858進(jìn)行檢測的基因芯片的陣列設(shè)計(jì)為:第1列為空白對照,第2列固定玉米植株的內(nèi)源基因作為陽性對照,第3列固定與玉米DNA序列高度 非同源非同源(填“同源”或“非同源”)的DNA片段作為陰性對照,第4~6列可分別固定 epsps基因epsps基因、pat基因pat基因、啟動子進(jìn)行檢測,每列重復(fù)多次以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。
(2)制備探針可采用缺口平移法(如圖2),即先利用DNA酶使DNA分子上產(chǎn)生 單鏈單鏈(填“單鏈”或“雙鏈”)缺口,再利用DNA聚合酶具有的核酸外切酶活性和聚合酶活性,在缺口處的5'末端每切除一個(gè)脫氧核苷酸,同時(shí)在3'末端添加一個(gè) 帶標(biāo)記帶標(biāo)記的脫氧核苷酸,最終制成所需探針。
(3)若該基因芯片檢測有效,轉(zhuǎn)基因玉米DBN9858的樣本在芯片的第 24562456列上均應(yīng)出現(xiàn)檢測信號,非轉(zhuǎn)基因玉米則應(yīng)在第 22列上出現(xiàn)檢測信號。若該基因芯片準(zhǔn)備商品化,你認(rèn)為還應(yīng)該在哪些方面進(jìn)一步改進(jìn)?提高檢測靈敏度、穩(wěn)定性;增加可檢測DNA序列種類,提高通用性;改進(jìn)技術(shù)簡化檢測過程、提高自動化水平等提高檢測靈敏度、穩(wěn)定性;增加可檢測DNA序列種類,提高通用性;改進(jìn)技術(shù)簡化檢測過程、提高自動化水平等。(答出2點(diǎn))
(4)對轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行檢測時(shí),常常會出現(xiàn)假陽性或假陰性的結(jié)果,可能的原因是 某些檢測成分在植物中天然存在,導(dǎo)致檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果;轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中外源基因表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞中被加工、修飾,難以檢測,出現(xiàn)假陰性結(jié)果;轉(zhuǎn)基因作物中的外源成分含量低、在加工過程中易變性,導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果某些檢測成分在植物中天然存在,導(dǎo)致檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果;轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中外源基因表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞中被加工、修飾,難以檢測,出現(xiàn)假陰性結(jié)果;轉(zhuǎn)基因作物中的外源成分含量低、在加工過程中易變性,導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。(答出2點(diǎn))
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】非同源;epsps基因;pat基因;單鏈;帶標(biāo)記;2456;2;提高檢測靈敏度、穩(wěn)定性;增加可檢測DNA序列種類,提高通用性;改進(jìn)技術(shù)簡化檢測過程、提高自動化水平等;某些檢測成分在植物中天然存在,導(dǎo)致檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果;轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中外源基因表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞中被加工、修飾,難以檢測,出現(xiàn)假陰性結(jié)果;轉(zhuǎn)基因作物中的外源成分含量低、在加工過程中易變性,導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果
【解答】
【點(diǎn)評】
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