解磷菌是土壤中的一類功能微生物，通過自身分泌的有機(jī)酸和磷酸酶等代謝產(chǎn)物，能使土壤中難溶性或不溶性的磷轉(zhuǎn)化成易于被植物吸收利用的有效態(tài)磷。從土壤中分離純化解磷菌的步驟如下：
（1）按規(guī)范流程配制蒙金娜無機(jī)磷（磷酸三鈣）培養(yǎng)基（見表格）：計(jì)算、稱量、溶化和 調(diào)pH、滅菌調(diào)pH、滅菌后倒平板。從功能來看，此培養(yǎng)基屬于 選擇選擇培養(yǎng)基，其中酵母膏中含有的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為 碳源、氮源、生長(zhǎng)因子（或特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）碳源、氮源、生長(zhǎng)因子（或特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）（填1種）。
| 物質(zhì) | 葡萄糖 | （NH4）2SO4 | NaCl | KCl | FeSO4?7H2O | MgSO4?7H2O | MnSO4?H2O | CaCO3 | 酵母膏 | 磷酸三鈣 | 瓊脂 |
| 質(zhì)量/g | 10 | 0.5 | 3 | 0.3 | 0.03 | 0.3 | 0.03 | 5 | 0.4 | 20 | 30 |
1
1
g,溶于9mL無菌水中，10倍稀釋法分別將梯度稀釋至10-1～10-6倍，可選擇 10-4、10-5、10-6g/mL
10-4、10-5、10-6g/mL
3個(gè)稀釋倍數(shù)用移液槍吸取100μL土壤稀釋液涂布至上述培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)5d。觀察出現(xiàn)解磷圈（透明圈）菌落的解磷圈直徑（D）、菌落直徑（d），以此初步確定菌株的解磷能力。已知接種的四個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為215、236、312和254，每毫升土壤原液中的解磷菌活菌數(shù)約為2.35×108個(gè)，則土壤原液的稀釋倍數(shù)為 10-5
10-5
倍。（3）從上述菌中找到解磷能力最強(qiáng)的菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，并進(jìn)行了磷酸酶的提取和分離，為了鑒定磷酸酶的分子純度可以采用
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
（方法）。（4）將解磷能力最強(qiáng)菌重新接種振蕩培養(yǎng)的菌懸液1mL，與1mL LB甘油液體培養(yǎng)基（含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的甘油），在2mL保藏管內(nèi)混勻（甘油最終質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%），標(biāo)記好菌株名稱、日期，保存于
-20
-20
℃冰箱。【答案】調(diào)pH、滅菌；選擇；碳源、氮源、生長(zhǎng)因子（或特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）；1；10-4、10-5、10-6g/mL；10-5；SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳；-20
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：13引用：1難度：0.7
相似題
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1．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應(yīng)用的除草劑，能抑制土壤細(xì)菌、放線菌和真菌的生長(zhǎng)。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細(xì)菌菌株，并對(duì)其計(jì)數(shù)（如圖所示），以期為修復(fù)污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 4:0:1組卷：17引用：3難度：0.7 -
2．回答下列關(guān)于微生物的問題．
阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深10～15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下為該菌株的鑒定過程．
（1）為獲得單菌落，可采用平板劃線法或法將初篩菌液接種在培養(yǎng)基上．46SM01菌落為粉白色，初期呈突起絮狀，在顯微鏡下觀察到，菌絲白色致密，且有分生孢子，細(xì)胞核直徑約1μm,初步推測(cè)為真菌，則其特征中，最能說明SM01是真菌的是有細(xì)胞核，且有分生孢子．SM01還一定具有的結(jié)構(gòu)有（多選）．
A．細(xì)胞膜 B．核糖體 C．?dāng)M核 D．莢膜
（2）表中培養(yǎng)液pH均為6.0，若對(duì)SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進(jìn)行測(cè)定，則應(yīng)選用表中的培養(yǎng)液，針對(duì)不選用的其他培養(yǎng)液，分別說明原因：
①缺少，SM01不能很好生長(zhǎng)
②具有，會(huì)影響對(duì)SM01自身產(chǎn)生的酶活力的測(cè)定結(jié)果
③缺乏，會(huì)影響SM01的生長(zhǎng)，也無法對(duì)阿拉伯膠酶活力進(jìn)行測(cè)定．
表 試驗(yàn)用培養(yǎng)液配方培養(yǎng)液 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4?7H2O KCl FeSO4?7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L發(fā)布：2025/1/2 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.5 -
3．為了防治大氣污染，煙氣脫硫是環(huán)保領(lǐng)域迫切需要解決的問題．研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌，并了解其生長(zhǎng)規(guī)律，進(jìn)行了如下操作．請(qǐng)回答下列問題：
（1）采樣與細(xì)菌的篩選：在某熱電廠煙囪周圍區(qū)域要盡量做到采集土樣．為確保能夠從樣品中分離到所需要的煙氣脫硫細(xì)菌，可以通過增加脫硫菌的濃度．
（2）馴化脫硫細(xì)菌：將篩選出的脫硫細(xì)菌接種于有少量無菌水的三角瓶中，邊攪拌邊持續(xù)通入SO2氣體幾分鐘，然后接種到培養(yǎng)基上，待長(zhǎng)出菌落后再重復(fù)上述步驟，并逐步延長(zhǎng)通SO2的時(shí)間，同時(shí)逐步降低培養(yǎng)基的pH．此操作的目的是分離出的脫硫細(xì)菌．
（3）培養(yǎng)與觀察：一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間），馴化后的脫硫細(xì)菌表現(xiàn)出穩(wěn)定的特征．用高倍顯微鏡（填“可以”或“不可以”）觀察到脫硫細(xì)菌的核糖體．
（4）探究生長(zhǎng)規(guī)律：在計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù)方法有稀釋涂布平板法和直接計(jì)數(shù)法．在用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的；通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌，通常推測(cè)統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目．發(fā)布：2025/1/1 8:0:2組卷：6引用：2難度：0.5
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