對疑似PRRS（豬繁殖與呼吸綜合征）的病料（從得病的動物身上采集的組織或器官）進行病毒分離鑒定，獲得一株高致病性PRRSV（豬繁殖與呼吸綜合征病毒），通過對高致病性PRRSV的N蛋白進行研究來探討該蛋白的抗原特性，并制備抗N蛋白的單克隆抗體?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PRRSV N蛋白基因的克隆：提取PRRSV中的總RNA，以其中相應(yīng)的RNA作為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成cDNA．再以cDNA為模板進行PCRPCR擴增，而獲得N蛋白基因。
（2）表達N蛋白細胞的制備：用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化合適的大腸桿菌細胞，為提高該過程的效率，需考慮重組質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度質(zhì)量和濃度等。將篩選過的受體細胞37℃培養(yǎng)液培養(yǎng)。
（3）單克隆抗體的制備與檢測：取免疫小鼠的脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合待融合細胞生長到培養(yǎng)孔底面積的110時進行抗體抗體（填物質(zhì)）篩選。檢出的陽性孔用有限稀釋法進行多次克隆化，建立單克隆抗體細胞株細胞株。最終獲得的單克隆抗體是否達到實驗要求的標志是N蛋白可與抗N蛋白的單抗發(fā)生特異性的結(jié)合N蛋白可與抗N蛋白的單抗發(fā)生特異性的結(jié)合，與無關(guān)蛋白不發(fā)生反應(yīng)。
（4）豬干細胞的應(yīng)用：胚胎干細胞可以進行基因敲除基因敲除，獲得適合猴子移植的豬器官，減弱或消除排斥反應(yīng)。
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【考點】單克隆抗體及其應(yīng)用．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；PCR；轉(zhuǎn)化；質(zhì)量和濃度；抗體；細胞株；N蛋白可與抗N蛋白的單抗發(fā)生特異性的結(jié)合；基因敲除
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：20引用：2難度：0.7
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1．為實現(xiàn)對肝癌的有效治療，研究人員通過比較肝腫瘤細胞和正常細胞間的差異，篩選有效的免疫治療靶點，制備相應(yīng)單克隆抗體并構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物。
（1）檢測發(fā)現(xiàn)細胞的CLDN6蛋白能夠促進腫瘤發(fā)生，選定其作為單克隆抗體的作用靶點。CLDN6蛋白是一個跨膜蛋白，包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，制備免疫小鼠所用的抗原時，應(yīng)提取區(qū)基因序列用于設(shè)計抗原。
（2）將CLDN6蛋白抗原注射到小鼠體內(nèi)，從該小鼠脾臟中獲取細胞，誘導其與骨髓瘤細胞融合，利用篩選得到雜交瘤細胞，經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體陽性檢測，多次篩選得到產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細胞，最終通過體內(nèi)或體外培養(yǎng)獲得大量單克隆抗體。
（3）將該單克隆抗體與抗癌藥物DMI 結(jié)合構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物（CLDN6-DMI）。用不同濃度的游離DMI、CLDN6-DMI或lgG-DMI（無關(guān)抗體-DMI）分別處理高表達CLDN6細胞和低表達CLDN6細胞，檢測細胞活力，結(jié)果如圖1：
由圖可知，CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達CLDN6細胞，依據(jù)是。
（4）如圖2表示抗體—藥物偶聯(lián)物CLDN6-DMI的作用機制：由圖分析，CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達CLDN6細胞的原因是。發(fā)布：2024/12/19 7:0:1組卷：3引用：1難度：0.6 -
2．為減少鼠源單克隆抗體可能引起的副作用，某研究團隊對鼠源單克隆抗體F進行改造，制備了人—鼠嵌合抗體F′，具體流程為：提取鼠源雜交瘤細胞RNA，逆轉(zhuǎn)錄后通過PCR擴增抗體F的基因序列，將其部分序列用人的相應(yīng)抗體基因序列進行替換，再構(gòu)建表達載體，在體外制備人﹣鼠嵌合抗體F′。為檢測抗體性質(zhì)，他們測定了F′單獨與抗原作用時對抗原的結(jié)合能力以及F′和F同時與抗原作用（F′與F初始濃度相同）時F′對抗原的結(jié)合能力，結(jié)果如下圖所示。下列敘述錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/19 1:0:1組卷：39引用：4難度：0.5 -
3．2020年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎授予發(fā)現(xiàn)丙肝病毒的三位科學家。丙肝病毒引起的丙型肝炎可導致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。如圖為利用小鼠甲為實驗材料研制丙肝病毒的單克隆抗體的實驗流程。下列敘述錯誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/19 6:0:1組卷：42引用：2難度：0.6
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