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試題詳情
如圖為cDNA文庫構(gòu)建的部分示意圖,請據(jù)圖回答:
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(1)①表示 反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄過程,需要添加的原料是 脫氧核苷酸脫氧核苷酸。
(2)①過程所用的酶與所有的DNA聚合酶相似,不能 在兩個游離的脫氧核苷酸之間催化形成磷酸二酯鍵在兩個游離的脫氧核苷酸之間催化形成磷酸二酯鍵,需要添加引物。由于大多數(shù)真核生物的mRNA3′端為多聚腺苷酸,因此,可以設(shè)計以 Oligo dTOligo dT為引物。
(3)②、③過程表示用大腸桿菌 RNase把DNA-RNA雜交分子中的RNA鏈降解成許多片段,以殘余的RNA為引物合成互補(bǔ)鏈,并經(jīng)過一系列過程去除中間的引物,由此形成的互補(bǔ)鏈處于間斷狀態(tài),所以④過程須添加 DNA連接酶DNA連接酶酶,形成 3,3,端帶有小段RNA的雙鏈cDNA。
(4)cDNA可以用PCR技術(shù)擴(kuò)增,一般設(shè)計長度在15-30個堿基之間的 兩兩種引物,引物過長,會導(dǎo)致與模板DNA的雜交效率下降,使PCR的反應(yīng)效率 降低降低。PCR時,預(yù)變性設(shè)置的時間明顯長于變性時間,目的是 使DNA充分變性,減少DNA復(fù)雜結(jié)構(gòu)對擴(kuò)增的影響,以利于引物更好的和模板結(jié)合使DNA充分變性,減少DNA復(fù)雜結(jié)構(gòu)對擴(kuò)增的影響,以利于引物更好的和模板結(jié)合。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】反轉(zhuǎn)錄;脫氧核苷酸;在兩個游離的脫氧核苷酸之間催化形成磷酸二酯鍵;Oligo dT;DNA連接酶;3,;兩;降低;使DNA充分變性,減少DNA復(fù)雜結(jié)構(gòu)對擴(kuò)增的影響,以利于引物更好的和模板結(jié)合
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/12/29 8:0:2組卷:2引用:1難度:0.7
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